人胶原酶I(CollagenaseI)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，将人I型胶原酶特异性抗体包被于微孔板作为固相捕获抗体，待测样本中的CollagenaseI与固相抗体特异性结合；孵育洗涤后，加入对应的酶标记检测抗体，形成特异性免疫夹心结构；去除未结合反应物后启动显色反应，显色产物的吸光度与样本中I型胶原酶含量成正比，通过标准曲线换算可精准定量样本中靶酶的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测 0.05μg/L

检测范围：0.1~6.4μg/L

反应时间：样本结合孵育 85min，酶结合物 50min，避光显色 19min

保存条件：试剂盒整体 2~8℃，浓缩洗涤液室温可放置 3 个月

显色系统：HRP-TMB 双液显色体系

检测波长：450nm，630nm 校正背景干扰

标准曲线绘制：四参数非线性回归构建标准曲线，用于样本定量检测

注意事项：组织样本匀浆后充分离心；试剂回温至室温再开始实验；避免阳光直射底物试剂
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温复温 28min，拆分酶标条，设定标准孔、样品孔、空白对照孔，每孔加稀释待测液 100μL，空白孔补稀释液。

直接添加酶标记二抗工作液 60μL，混匀后封板密封板面。

37℃避光孵育 60min，避免频繁开关孵育箱。

去膜弃液，洗涤液浸泡每孔 40s，拍干，连续洗板 4 次。

加入显色 A、B 液各 50μL，遮光 37℃显色 14min。

滴入终止液 50μL，摇晃混匀终止反应。

450nm 检测吸光度，对照标准曲线得到胶原酶 I 浓度。