人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA试剂盒

本试剂盒基于酶联免疫吸附试验特异性夹心原理，预包被CD16特异性抗体于酶标板，样本中的FcγRⅢ抗原与固相抗体特异性结合，随后加入辣根过氧化物酶标记抗体形成免疫复合物，洗涤纯化后进行底物显色，显色程度与样本中靶蛋白含量呈正相关，通过吸光度检测与标准曲线拟合，实现FcγRⅢ的定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：0.35 pg/mL

检测范围：2pg/mL～105pg/mL

反应时间：37℃孵育 110min，酶结合物 40min，显色 17min，总 167min

保存条件：2～8℃避光密封，铝箔袋开封后板条尽快使用

显色系统：TMB 显色体系，硫酸终止液

检测波长：450nm，参比 600nm

标准曲线绘制：7 组浓度梯度，四参数拟合，每板必须附带标准品

注意事项：加样顺序严格先标准品再样本，避免交叉污染
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

工作液配制：稀释浓缩洗涤液，梯度稀释 CD16 标准品，待测样本混匀备用。

孔位加样：每孔添加标准品、待测样品、空白试剂 100μL，避免气泡残留。

一步法酶抗混匀添加：每孔加入酶标检测抗体 100μL，封板轻晃酶标板。

免疫孵育：37℃避光孵育 58min。

洗板操作：弃去孔内液体，洗液浸泡 30s 拍干，重复洗板 5 次。

底物显色：加入显色混合液，暗处显色 14min。

终止检测：终止液终止反应，450nm 测定 OD 值，计算样本 CD16 含量。