人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA试剂盒

本试剂盒以双抗体夹心ELISA法为检测核心原理，酶标板微孔固定CD32特异性捕获抗体，待测样本中的FcγRⅡ抗原与固相抗体特异性结合，加入酶标记检测抗体形成夹心免疫结构，经洗涤去除非特异性结合物质后，启动酶促显色反应，终止后测定吸光度值，依据标准曲线即可精准定量样本中FcγRⅡ的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：0.76 ng/L

检测范围：6ng/L～380ng/L

反应时间：室温样本结合 65min，二抗 55min，显色 19min，总 139min

保存条件：试剂盒主组分 2-8℃，洗涤浓缩液室温储存

显色系统：A、B 液等体积混匀后显色，盐酸终止

检测波长：450nm 单波长

标准曲线绘制：5 点梯度，最小二乘法绘制标准曲线

注意事项：禁止使用含抗凝剂肝素过量的血浆样本，会抑制抗原结合
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本前处理：体液样本 3500r/min 离心 8min 取上清，按比例稀释；梯度配制 CD32 标准品。

上板加样：酶标板对应孔加入标准品、待测样本、空白对照 100μL。

酶标记抗体添加：所有反应孔加入 HRP 标记 CD32 抗体 100μL，密封板膜。

恒温孵育：37℃避光孵育 62min。

洗板去污：弃液后洗液浸泡 40s 拍干，连续洗涤 4 次。

避光显色：加入 TMB 显色液，室温反应 16min。

终止定量：终止液终止显色，酶标仪 450nm 读数，拟合曲线计算 CD32 浓度。