本试剂盒基于双抗体夹心ELISA技术原理,96孔微孔板固相包被人生长相关蛋白43(GAP-43)特异性抗体,检测时加入待测样本与标准品,样本中的GAP-43抗原与固相抗体特异性结合,洗涤去除未结合组分后加入酶标记二抗,形成夹心免疫复合物,经TMB底物显色、终止反应后,检测特定波长吸光度,吸光度值与样本中GAP-43蛋白含量成正比,依托标准曲线完成定量检测。
基本参数:

产品名称:人生长相关蛋白43(GAP-43)ELISA试剂盒
英文名称:GAP-43 ELISA Kit
货号:Y-E3503
规格:48T/96T
灵敏度:最小检出 0.47ng/mL
检测范围:2.8ng/mL ~ 950ng/mL
反应时间:37℃温育 92min,酶标记二抗 60min,避光显色 25min,总时长 3h17min
保存条件:试剂盒主体 2~8℃,终止液常温密闭存放,板条开封后必须密封防潮
显色系统:单组分 TMB 底物显色,1N 硫酸终止反应
检测波长:仅 450nm 读取吸光度数值
标准曲线绘制:最小二乘法线性拟合,8 个标准品梯度点
注意事项:脑组织匀浆样本需充分离心去除组织沉淀;全程防止底物接触金属器具导致提前变色
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

试剂盒所有试剂室温静置 21min,稀释浓缩洗涤液,梯度稀释 GAP-43 标准品,划分酶标板孔。
标准孔加入 50μL 梯度标准液;样本孔加 50μL 稀释液 + 10μL 待测样本;空白孔不加液体。
除空白孔外每孔加入酶标记抗体工作液 100μL,封板 37℃孵育 59min。
弃去孔内液体,洗涤液加满每孔静置 30s,甩干循环 5 次,板条拍干。
显色 A、B 液各 50μL 每孔添加,混匀避光显色 12min。
加入终止液 50μL 混匀终止反应。
酶标仪 450nm 读数,绘制标准曲线计算 GAP-43 含量。
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