人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测技术，酶标板预先包被人GTP酶活化蛋白特异性抗体，加入梯度标准品和待测样本，样本中的GAP蛋白与固相抗体发生特异性免疫结合，洗涤去除未结合物质后，加入HRP标记的GAP检测抗体，形成稳定的免疫复合物，经TMB显色、终止反应后测定OD值，依据标准曲线计算样本中GAP蛋白的含量。
基本参数‌：

产品名称：人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA试剂盒

英文名称：GAP  Elisa Kit
货号：Y-E781

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.12ng/mL，适配细胞信号通路蛋白检测

检测范围：0.25ng/mL - 28ng/mL，覆盖细胞增殖、分化相关样本表达区间

反应时间：实验总时长90分钟

保存条件：2-8℃密封冷藏，严禁冷冻，防止蛋白构象改变

有效期：原装未拆封有效期12个月

特异性：特异性结合人GAP蛋白，与GTP酶家族其他调控蛋白无交叉反应

重复性：板内、板间变异系数均＜8%

注意事项：组织样本充分匀浆裂解，去除杂质；避免样本反复冻融
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒试剂室温平衡 35min，稀释洗涤液；GAP 标准品梯度稀释，组织裂解液样本离心取澄清上清。

包被板分孔加标准品、待测上清 100μL，空白孔添加样本稀释液。

一步添加酶标记二抗工作液 100μL，混匀封板。

37℃孵育 75min，保持孵育湿度。

洗板 5 次，每次浸泡 40s，吸干残留洗液。

显色液避光显色 19min。

终止液终止反应，450nm 读数定量 GAP 蛋白含量。
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