本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板预先包被人食欲素/阿立新B(OX-B)特异性抗体，加入待测样本和系列标准品后，样本中的OX-B抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记配对抗体，形成稳定的抗体-抗原-酶标抗体复合物，底物酶促显色后终止反应，酶标仪检测吸光度，数值与样本中OX-B含量呈正相关，可精准定量样本靶标浓度。
基本参数：
产品名称：人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA试剂盒
英文名称：OX-B Elisa Kit
货号：Y-E194
规格：48T/96T
灵敏度：检出下限 6.3pg/mL
检测范围：35pg/mL ~ 1300pg/mL
反应时间：样本孵育 66min，二抗结合 47min，底物显色 17min，总用时 2h10min
保存条件：2~8℃避光储存整套试剂盒，浓缩洗涤液室温放置即可，无需冷藏
显色系统：双组份配比显色体系，强酸终止液终止
检测波长：450nm 为主，650nm 作为参比校正
标准曲线绘制：四参数 Logistic 模型绘制曲线，6 个稀释梯度
注意事项：空腹与饱腹样本指标差异极大，采样需统一空腹时段；样本避免反复冻融
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂室温平衡 34min，稀释洗涤缓冲液，逐级稀释 OX-B 标准品，准备酶标板。
标准品孔加 50μL 梯度 OX-B 标准溶液；样本孔加 43μL 稀释液 + 7μL 待测样本；空白孔不加试剂。
检测孔加入 HRP 标记抗 OX-B 抗体 100μL，封板膜封板，37℃孵育 70min。
弃液洗板，洗涤液浸泡每孔 40s 甩干，重复洗板 6 次，拍干微孔板。
每孔加入显色双底物液各 50μL，轻震混匀，37℃避光显色 19min。
每孔加入终止液 50μL 混匀终止显色。
450nm 测定 OD 值，标准曲线换算样本 OX-B 浓度。
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