人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，将抗人可溶性白细胞抗原G（sHLA-G）单克隆抗体包被于微孔板，待测样本中的sHLA-G抗原与固相抗体特异性结合，再加入酶标记多克隆抗体形成夹心复合物，洗涤显色后检测吸光度，数值与样本中sHLA-G含量正相关，实现定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.4 U/mL

检测范围：0.25 U/mL ~ 16 U/mL

反应时间：孵育 80min，二抗 45min，显色 18min

保存条件：试剂盒整体 2~8℃冷藏，稀释后洗涤液常温可放置 5 天

显色系统：单组分 TMB 显色底物

检测波长：450nm，参比 620nm

标准曲线绘制：四参数 Logistic 拟合标准曲线，自动换算待测样本浓度

注意事项：血清、血浆、细胞上清均可检测，不同样本基质不可混用曲线
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 34min，取出酶标板，设置空白、对照、标准、样本孔。

除空白孔外每孔加样 50μL，立刻加入酶标记液 50μL，严实封板。

低速振荡混匀，37℃孵育 67min。

倒净孔内液体，洗涤液浸泡 37s，充分拍干，洗板 6 次。

显色液 A、B 各 50μL，避光显色 18min。

加入终止液 50μL 终止显色。

450nm 测 OD 值，标准曲线定量 sHLA-G。