人类白细胞抗原G(HLA-G)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被HLA-G特异性抗体，实验中样本内的人类白细胞抗原G与包被抗体特异性结合，随后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，充分洗涤后加入显色底物进行催化显色，显色强度与样本中HLA-G含量成正比，依据标准曲线吸光度数值可定量检测样本中HLA-G的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限≤0.03ng/mL

检测范围：0.08ng/mL–8ng/mL

反应时间：一抗结合 50min，酶标二抗 40min，显色 12min，整体流程约 2h10min

保存条件：整套试剂盒 2～8℃冷藏，禁止冷冻；浓缩洗涤液出现结晶 37℃水浴融化后使用

显色系统：A、B 双液混合 TMB 显色体系

检测波长：单波长 450nm 直接读数

标准曲线绘制：标准品做 7 个梯度稀释，线性回归拟合曲线计算样本浓度

注意事项：血清样本需无溶血、无脂血；终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤黏膜
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

样本预处理：离心分离待测生物样本，去除杂质沉淀，用样本稀释液按规定倍数稀释，颠倒混匀；

加样布设：酶标板预留空白孔、标准品梯度孔、待测样品孔，每孔精准添加对应液体 100μL；

酶标共孵：无需洗板，直接向全部加样孔加入酶标记抗体工作液，覆膜封口，37℃水浴孵育 45min；

反复洗板：倾倒孔内废液，洗板液注满每孔静置 25s，倒扣拍干，连续洗涤 4 轮，彻底去除未结合反应物；

避光显色：每孔依次加入 TMB 显色液 A 液与 B 液，避光环境下 37℃孵育 12min，观察孔内蓝色显色程度；

终止液终止：每孔加入终止液终止酶促反应，轻微震荡酶标板使其混匀均匀；

上机检测：酶标仪设定主波长 450nm、参比波长 630nm 读取吸光度，拟合标准曲线计算样本 HLA-G 含量。