人脾脏酪氨酸激酶(Syk)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测技术，酶标板微孔包被Syk特异性捕获抗体，待测样本中的脾脏酪氨酸激酶与固相抗体特异性结合，加入酶标记检测抗体形成完整夹心复合物，经洗涤去除非特异性结合组分后进行底物显色，终止反应后检测OD值，依据标准曲线精准定量样本中Syk的浓度水平。
产品参数：

‌灵敏度：0.56 pg/mL

检测范围：2.9pg/mL～118pg/mL

反应时间：37℃孵育 97min，酶标二抗 47min，显色 17min，总 161min

保存条件：试剂盒 2-8℃避光，激酶类标准品避免反复冻融

显色系统：TMB 显色体系，2M 硫酸终止反应

检测波长：450nm

标准曲线绘制：6 点四参数 Logistic 标准曲线

注意事项：细胞裂解液不可含强磷酸酶抑制剂，会干扰靶标蛋白结构
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本前处理：脾细胞裂解液离心去除沉淀，稀释待测上清；梯度稀释 Syk 标准品稀释液。

板孔点样：各微孔依次加入标准品、待测样本、空白对照液 100μL。

酶结合物添加：每孔加入酶标记 Syk 检测抗体 100μL，封板轻摇混匀。

免疫孵育：37℃避光孵育 59min。

洗板去污：弃液后洗液浸泡 30s 拍干，连续洗涤 5 次。

底物显色：加入显色工作液，避光显色 18min。

终止检测：终止液终止显色，450nm 测定吸光值，依据标准曲线定量 Syk 浓度。