人前病毒整合位点1(Pim1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板预先包被人前病毒整合位点1特异性捕获抗体。待测样本中的Pim1蛋白与固相捕获抗体特异性结合，孵育洗涤去除未结合物质后，加入酶标记检测抗体形成夹心免疫复合物，再次洗涤干净后加入显色底物进行反应，终止显色后检测吸光度，根据标准曲线对应的浓度梯度，定量计算样本中Pim1蛋白的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测 0.085ng/mL

检测范围：0.25ng/mL～16ng/mL

反应时间：加样孵育 66min，酶结合物 51min，避光显色 18.5min

保存条件：整套试剂 2～8℃；标准品干粉溶解后分装 - 20℃冻存，避免反复冻融

显色系统：一体式预制 TMB 显色工作液

检测波长：450nm/650nm 双波长

标准曲线绘制：四参数 Logistic 拟合，剔除异常值后生成标准曲线

注意事项：操作过程微孔板避免强光直射，防止底物提前氧化变色
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温放置 30min，稀释浓缩洗涤液；固定酶标板，标注标准孔、样本孔、空白孔。

标准孔加入梯度 Pim1 标准品 50μL，待测孔加入稀释样本 50μL，空白孔无试剂添加。

每孔加入一步法酶标记一抗工作液 100μL，封板轻微震荡混匀。

37℃避光孵育 60min，稳定环境温度。

洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 30s，甩出液体后拍干板条。

依次加入显色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃显色 14min。

终止液终止显色，酶标仪 450nm 测吸光度，绘制标准曲线计算 Pim1 含量。