人羟赖氨酸(Hyl)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验原理，酶标板固定纯化的人羟赖氨酸抗原。检测体系中，样本内的羟赖氨酸与固相抗原竞争结合酶标特异性抗体，孵育洗涤后进行底物显色，待测物含量与显色深度呈负相关，终止反应后测定吸光度，通过标准曲线换算出样本中羟赖氨酸的浓度含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.12μmol/L

检测范围：0.36μmol/L～23.04μmol/L

反应时间：样本孵育 72min，二抗温育 57min，显色 20min

保存条件：未拆封 2～8℃；开封试剂密封冷藏，保质期缩短至 30 天

显色系统：双组份现配 TMB 显色体系

检测波长：450nm 直接测定

标准曲线绘制：五点梯度标准品，非线性四参数拟合

注意事项：胶原水解样本需充分离心取上清，固体残渣禁止加入微孔孔内
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒试剂室温回温 28min，配制洗涤工作液；取出包被板条划分实验孔组。

梯度 Hyl 标准品 50μL 加入标准孔，预处理待测样本 50μL 加入样本孔，空白孔留空。

非空白孔加入一步法酶联检测抗体 100μL，封板后轻微震荡。

37℃避光孵育 60min，规避光照干扰。

弃液洗板 5 次，每次浸泡 32s，反复洗涤去除未结合组分，拍干板条。

每孔加入显色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光显色 15min。

加入终止液 50μL 混匀，10min 内 450nm 检测吸光值，定量羟赖氨酸浓度。