人上皮细胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被抗人上皮细胞粘附分子(CD362)特异性抗体。样本中的Ep-CAM抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离物质后，加入辣根过氧化物酶标记检测抗体形成免疫复合物，经显色、终止反应后测定吸光度，结合标准曲线精准定量样本中该粘附分子的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出 0.087ng/mL

检测范围：0.28ng/mL～17.92ng/mL

反应时间：室温孵育 69min，37℃二抗 58min，避光显色 20.8min

保存条件：2～8℃避光密封，标准品干粉溶解后分装冻存可延长使用周期

显色系统：一体式预制 TMB 显色体系

检测波长：450nm 主波长，620nm 参比

标准曲线绘制：五点梯度多项式回归生成标准曲线

注意事项：肿瘤组织匀浆样本充分去除组织残渣，避免堵孔造成 OD 值异常偏高
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温复温 35min，稀释浓缩洗涤液；按需拆板标注各类孔位。

梯度 Ep-CAM 标准品 50μL 加入标准孔，稀释后待测样本 50μL 加入样本孔，空白孔留空不加样。

非空白孔加入一步法酶标记一抗工作液 100μL，密封封板膜。

37℃恒温避光孵育 72min，细胞粘附分子大分子适配长时孵育。

洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 40s，甩出液体后彻底拍干孔内残留液体。

每孔添加显色底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 19min。

滴加终止液终止反应，10min 内 450nm 读取 OD 值，计算 Ep-CAM 蛋白浓度。