人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，固相微孔板包被人EAR3特异性抗体，待测样本、标准品中的EAR3抗原与固相抗体精准结合，孵育洗涤后加入酶标记配对抗体，形成特异性夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后，酶标仪检测吸光度数值，其与样本中EAR3浓度呈正相关，可准确测定样本靶标含量。
基本参数‌：

产品名称：人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)ELISA试剂盒

英文名称：EAR3 Elisa Kit
货号：Y-E900

规格：48T/96T

灵敏度：检出限 2.3pg/mL

检测范围：13pg/mL ~ 860pg/mL

反应时间：室温孵育 81min，酶二抗 56min，底物显色 17min，合计 2h34min

保存条件：未拆封试剂盒 2～8℃，标准品干粉 - 20℃长期保存，复溶后禁止再次冻存

显色系统：A+B 显色液配比混匀后避光反应，酸性终止液终止

检测波长：单 450nm 波长检测

标准曲线绘制：五参数回归拟合曲线，7 组标准稀释梯度

注意事项：寄生虫感染样本数值易异常升高；洗板每孔液体必须完全拍干无残留
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂室温复温 28min，配制洗涤工作液，倍比稀释 EAR3 标准品，拆分多余板条密封保存。

标准品孔添加 50μL 梯度标准品；样本孔加 48μL 稀释液 + 12μL 样本；空白孔空置。

非空白孔加入酶偶联抗 EAR3 抗体 100μL，封板膜密封，37℃孵育 62min。

撕膜倒掉废液，洗涤液浸泡每孔 36s，甩干洗板 5 次，充分拍干微孔板。

显色双液各 50μL 加入每孔，混匀后避光显色 16min。

滴加终止液 50μL 混匀终止酶促显色。

酶标仪 450nm 测定 OD 值，定量样本 EAR3 浓度。
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