本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理,微孔板预先包被人Serpina3g特异性抗体,待测样本与梯度标准品中的Serpina3g抗原与固相抗体特异性结合,洗涤纯化反应体系后加入酶标记配对抗体,形成特异性免疫复合物,底物显色终止后检测吸光度,吸光度值与样本中Serpina3g含量呈正相关,可实现定量检测。
基本参数:

产品名称:人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)ELISA试剂盒
英文名称:Serpina3g ELISA Kit
货号:Y-E2581
规格:48T/96T
灵敏度:最低检出 6.7pg/mL
检测范围:38pg/mL ~ 1550pg/mL
反应时间:37℃孵育 91min,酶结合物 61min,避光显色 24min,总时长 3h16min
保存条件:整套试剂 2~8℃冷藏,标准品干粉 - 20℃储存,复溶后禁止二次冻融
显色系统:A、B 显色液混合后避光反应,硫酸终止
检测波长:450nm+650nm 双波长校正读数
标准曲线绘制:四参数非线性拟合曲线,6 组稀释梯度
注意事项:炎症急性期样本指标大幅升高,超量程必须稀释复测;洗板充分去除非特异性吸附
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

全部试剂室温平衡 31min,稀释洗涤缓冲液,逐级稀释 Serpina3g 标准品,拆分多余板条冷藏保存。
标准孔加 50μL 梯度标准溶液;待测孔加 44μL 稀释液 + 16μL 待测样本;空白孔不加液体。
除空白孔外每孔加入 HRP 标记抗体工作液 100μL,封板 37℃孵育 67min。
倒掉孔内废液,洗涤液浸泡 40s 甩干,循环洗板 6 次,吸水纸拍净残液。
每孔加入显色 A、B 液各 50μL,轻微震荡混匀,37℃避光显色 19min。
每孔加注终止液 50μL 混匀终止酶促反应。
酶标仪 450nm 读取吸光度,定量 Serpina3g 蛋白含量。
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