本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理,预先将特异性PPIL1抗体包被于酶标板微孔内壁,实验时样本、标准品中的人PPIL1抗原会与包被抗体特异性结合,洗板去除未结合杂质后,加入酶标记二抗形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,再次洗板去除游离酶标抗体,加入底物进行显色反应,底物在酶的催化下产生有色产物,最终通过酶标仪测定吸光度值,吸光度值与样本中PPIL1含量呈正相关,结合标准品曲线即可精准计算样本中PPIL1的浓度。
基本参数:

产品名称:人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA试剂盒
英文名称:PPIL1 Elisa Kit
货号:Y-E922
规格:48T/96T
灵敏度:最低检出浓度≤0.08ng/mL
检测范围:0.15ng/mL~10ng/mL
反应时间:样本孵育 60min,二抗孵育 45min,底物显色 15min
保存条件:未拆封试剂盒 2~8℃避光储存;开封后板条密封 2~8℃可存 7 天
显色系统:TMB 单组分显色液,终止液为 2M 稀硫酸
检测波长:主波长 450nm,参比波长 630nm
标准曲线绘制:以标准品浓度为 X 轴,OD 均值为 Y 轴,四参数 Logistic 拟合曲线
注意事项:样本需离心去除沉淀杂质,避免反复冻融样本超过 2 次
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 30min,取出包被 PPIL1 抗体微孔板,弃板内原有保护液,洗涤缓冲液洗板 2 次,拍干孔内残留液体。
设置空白孔、标准品孔、待测样本孔,标准品孔依次加入梯度稀释 PPIL1 标准品 50μL,样本孔加入稀释后待测样本 50μL,空白孔加等量样本稀释液。
每孔立即加入 HRP 标记检测抗体工作液 50μL,封板膜密封微孔板,37℃恒温孵育 60min。
揭去封板膜,倒掉孔内全部液体,每孔加满洗涤液静置 30s 后甩去,重复洗板 5 次,倒扣吸水纸上充分拍干。
所有孔依次加入显色底物 A 液、B 液各 50μL,轻柔震荡混匀,37℃避光显色 15min。
每孔快速加入终止液 50μL 终止酶促显色反应,轻晃微孔板混匀。
酶标仪设置 450nm 波长,15min 内读取各孔 OD 吸光度值,根据标准品曲线计算样本 PPIL1 浓度。
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