本试剂盒基于双夹心ELISA免疫检测原理，酶标板预先包被靶向人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1的特异性抗体，待测样本中的目标蛋白与固相抗体特异性结合，孵育洗板后加入HRP标记配对二抗形成三元免疫复合物，再次洗板后启动底物显色，显色深浅与目标蛋白含量正相关，通过吸光度检测和标准曲线拟合，完成该蛋白的定量检测。
基本参数：
产品名称：人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1ELISA试剂盒
英文名称：Non-Phosphorylated ELISA Kit
货号：Y-E2916
规格：48T/96T
灵敏度：最低检出 0.09ng/mL
检测范围：0.18～12ng/mL
反应时间：室温孵育 72min，二抗 43min，避光显色 19min
保存条件：整套试剂 2～8℃避光储存，禁止冷冻结冰分层
显色系统：A、B 液分开取用混合显色
检测波长：450nm 为主，620nm 扣除背景干扰
标准曲线绘制：六组梯度标品，软件自动拟合非线性曲线
注意事项：样本采集后低温分装冻存，磷酸化修饰蛋白会产生交叉干扰
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒全部试剂室温回温 30min，靶蛋白包被酶标板去除孔内保护液，洗涤液洗板 2 次，吸水纸拍干微孔。
设置空白对照孔、梯度标准品孔、血清样本孔；标准品孔加入未磷酸化 IGFBP-1 标准品 50μL，样本孔加入稀释血清样本 50μL，空白孔加稀释缓冲液。
每孔加入 HRP 标记检测抗体 50μL，封板膜密封，37℃孵育 60min。
弃孔内液体，洗板液加满每孔静置 35s 倒掉，重复洗板 5 次，倒置拍干。
依次加入显色 A 液、B 液各 50μL，遮光室温显色 17min。
每孔加注终止液 50μL，轻摇混匀终止反应。
450nm 测 OD 吸光度，绘制标准曲线计算目标蛋白浓度。
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