人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双夹心酶联免疫吸附原理，固相酶标板包被人CagA特异性抗体，可特异性捕获样本中的细胞毒素相关蛋白A，孵育结合后洗除游离杂质，加入酶标记配对二抗形成免疫复合物，充分反应洗板后加入底物显色，终止显色后检测吸光度，依据标准曲线精准测定样本中CagA蛋白的含量。
基本参数‌：

产品名称：人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒

英文名称：CagA  Elisa Kit
货号：Y-E362

规格：48T/96T

灵敏度：≤0.06ng/mL

检测范围：0.11～9.3ng/mL

反应时间：37℃孵育 83min，酶标二抗 52min，避光显色 15min

保存条件：包被板密封带干燥剂 2～8℃，其余试剂同温避光

显色系统：单瓶装即用 TMB 显色液

检测波长：450nm+650nm 双波长校正本底

标准曲线绘制：四参数拟合曲线，空白孔基线归零处理

注意事项：幽门螺杆菌分离菌液样本需灭活后再进行检测操作
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 33min，CagA 抗原包被微孔板弃封存液，洗涤缓冲液洗板 2 次，倒扣拍干微孔。

区分空白孔、阳性标准品梯度孔、血清样本孔；标准品孔加入 CagA 阳性标准品 50μL，样本孔加入稀释血清样本 50μL，空白孔补稀释液。

每孔加入酶标记抗人二抗 50μL，封板密封，37℃恒温孵育 64min。

去除封板膜倾倒孔内液体，洗涤液浸泡每孔 30s 弃除，洗板 5 次，彻底拍干微孔。

每孔加入显色底物混合液 100μL，避光室温显色 17min。

加入终止液 50μL 混匀终止酶促反应。

酶标仪 450nm 测 OD 值，判定幽门螺杆菌 CagA 抗体阳性结果。
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