人美洲商陆素(PWM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫吸附试验特异性夹心检测原理，将PWM特异性抗体包被于酶标板微孔，待测样本、标准品中的美洲商陆素可与固相抗体特异性结合，随后加入酶标记特异性抗体形成免疫夹心复合物，经洗涤去除非特异性结合成分，加入显色底物进行酶促显色反应，反应终止后测定各孔OD值，根据标准曲线回归方程，精准定量样本中PWM的含量水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出浓度 2.1 ng/L

检测范围：8ng/L～450ng/L

反应时间：样本 37℃孵育 80min，酶标试剂 50min，显色 18min，总时长 148min

保存条件：试剂盒 2-8℃冷藏，浓缩标准品 - 20℃冻存，洗涤液可室温放置 3 个月

显色系统：单一 TMB 底物液，专用终止液终止

检测波长：450nm 单波长测定吸光度

标准曲线绘制：7 个梯度点，坐标 OD - 浓度，直线拟合，R² 需大于 0.995 方可使用

注意事项：不可使用含叠氮钠样本，叠氮钠会灭活 HRP 酶活性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

工作液配制：浓缩洗涤液用纯水稀释备用，梯度配制 PWM 标准品稀释体系，待测原液无需稀释直接备用。

孔位加样：酶标板各对应孔加入标准品、待测样品、空白液 100μL，避免液体挂壁。

一步法酶抗添加：所有反应孔加入酶标记 PWM 抗体工作液 100μL，封板震荡混匀。

孵育结合：37℃恒温箱孵育 70min，保证抗原抗体复合物稳定结合。

洗板去污：倒掉孔中液体，洗涤液浸泡每孔 35s，拍干，重复洗板 5 轮。

底物显色：加入显色混合液，避光显色 16min，观察梯度显色差异。

终止测值：终止液终止反应，酶标仪 450nm 读数，依据标准曲线计算样本 PWM 浓度。