BL21感受态 语纯生物（Nexell） 货源稳定 可按需定制 新品

BL21感受态    语纯生物（Nexell） 货源稳定   可按需定制

产品概述

产品描述

BL21是*早开发的用于原核表达的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如：pET系列)；但含有大肠杆菌RNA聚合酶，适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。其中ompT可减少外膜蛋白酶的表达量，从而减少重组蛋白的水解，提高表达产量；hsd基因变异可致菌株细胞内的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，从而提高PCR产物的转化效率。BL21感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。

产品优势

✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达

产品组分

基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)

BL21感受态    语纯生物（Nexell） 货源稳定   可按需定制 

产品应用

BL21感受态细胞适用于依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。

实验流程

1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。

2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。

✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。

3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。

✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。

4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。

5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。

6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。

保存条件

-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。

相关参数

【特别声明】

1. 本产品仅用于科研实验，不可用于临床治疗。

2. 使用产品时应注意无菌操作，避免污染。

3. 操作时请做好防护工作，避免与皮肤黏膜接触。

4. 本产品请在有效期内使用，如有破损渗漏，请勿使用。

上海语纯生物科技有限公司，是由具有生命科学、生物技术背景人员共同创办的技术企业。公司主营业务:细胞系，原代细胞，原代内皮、上皮、成纤维、软骨细胞等专用培养基（可替代进口品牌例如sciencell货号：1001），细胞基础培养基及定制氨基酸缺陷培养基（例如：DMEM高糖、RPIM1640、MEM、DMEM/F12等），微生物培养基及菌种，进口胎牛血清、国产胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、马血清、无外泌体胎牛血清、透析胎牛血清等，可根据需求定制。生化试剂盒，elisa试剂盒，动物血液制品：动物血浆、动物红细胞、动物全血、动物白细胞等，感受态，各种生化试剂以及耗材。为高校、食品、医药、生物研究等领域提供相关技术支持和服务。