产品特性
-该菌株为 recA+基因型,故不用于质粒的保存;
-属于大肠杆菌 B 株系列,可用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的蛋白表达;
-pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因,T7 溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够
降低目的基因的背景表达水平,但不干扰 IPTG 诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
质量控制
除 pLysS 外,无外源质粒 DNA 残留;
化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保*高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。