琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒
产品介绍:
SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
测定原理
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2.6-DPIP的还原速度,代表SDH酶活性。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品名称 | 琥珀酸脱氢酶(SDH)测试盒 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 |
检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
分类 | 三羧酸循环系列 |
货号 | YSH3329 |
检测原理:
人工电子受体比色法(MTT/INT):SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸;脱下氢还原四唑盐生成有色甲臜,450‑570 nm 测吸光度计算酶活。
泛醌类似物偶联显色法:以可溶性泛醌类似物为电子受体,还原产物与显色剂结合产生颜色变化。
DCIP(2,6‑二氯靛酚)褪色法:还原当量将蓝色 DCIP 还原为无色,600 nm 吸光度下降速率即为 SDH 活性。
氧气消耗速率法(氧电极配套试剂盒):SDH 脱氢经呼吸链消耗溶解氧,氧浓度下降速率表征酶催化活力。
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操作步骤:
操作仪器预热:将可见分光光度计预热30min,调节波长至540nm,用蒸馏水调零标准曲线绘制:
取6支具塞刻度试管,分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液(10mg/mL)
用蒸馏水补至1.0mL,再加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
立即用流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值
以葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定:
试剂名称(μL) 空白管 测定管
提取液/样本 100 100
试剂一 700 700
试剂二 100 100
混匀后37℃水浴30min,立即加入2.0mL显色工作液,沸水浴5min
流水冷却至室温,定容至25mL,摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定
关键字: 琥珀酸脱氢酶;SDH;测试盒;
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