产品简介
DiA 为亲脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），扩散进入细胞膜（比 DiO 扩散速度快），常用于神经元的示踪。最显著的特点就是能与 DiI（DiIC18(3)）联合使用进行双色标记。DiA 能用于甲醛固定组织染色，研究发现某些情况下当 DiO 不能标记固定组织时，DiA 可得到良好标记。DiA 水溶液中的荧光非常弱，但与磷脂双层膜结合后，光谱迁移荧光明显加强。因其发射光谱非常广，可被绿色，橙色，甚至是红色滤片检测到（见下图 DiA 与膜结合后的荧光激发和发射光谱图）。
本品以DiA的碘盐形式提供，适用于荧光检测研究。
产品特性
同义名：4-Di-16-ASP; 4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;
化学名：Benzoxazolium, 3-octadecyl-2-[3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl]-, perchlorate
分子式：C46H79IN2
分子量：787.04 g/mol
纯度：≥95%
Ex/Em：491/613 nm（甲醇）
外观：红色固体
溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇
储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。
使用方法【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。
1.染色液制备
储存液制备：用 DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04 g/mol） 溶于6.35ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃， 避免反复冻融，且要避光保存。
工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。
2.悬浮细胞染色
1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5）再重复3），4）步骤两次。
3.贴壁细胞染色
将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。
在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。
附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表
货号 | 荧光探针 | 最大激发/最大发射波长 （Ex/Em） | 滤光片编号* |
Omega 公司 | Chroma 公司 |
FS1190-10MG | DiI | 549/565 nm | XF108, XF32 | 41002, 31002 |
FS1189-10MG | DiO | 484/501 nm | XF100,XF23 | 41001, 31001 |
FS1192-25MG | DiD | 644/663 nm | XF110, XF47 | 41008, 31023 |
FS1193-25MG | DiR** | 748/780 nm | XF112 | 41009 |
FS1194-25MG | DiA | 491/613 nm | XF21 | 31024 |
*：滤光片编号是荧光显微镜检测的建议宽带滤片设置。 **：DiR 的荧光发射肉眼不可见，必须通过 CCD 摄像头或其他近红外敏感检测器检测。 |
注意事项
（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
关键字： DiA 细胞膜绿色荧光探针;DiR;DiI;DiO;DiD;
主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞检测等技术和产品为研发核心，产品广泛应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域。