照高效液相色谱法（附录Ⅴ d）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/l磷酸二氢钾溶液-0.0025mol/l庚烷磺酸钠水溶液-乙腈（5:5:2）为流动相；检测波长为220nm。理 论板数按吗啡峰计算不低于1000。
固相萃取柱系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；以测定法中相同的处理条件和洗脱条件试验。精密量取浓度为每1ml中含0.5mg的吗啡对照品溶液0.5ml，置处理后的固相萃取柱上，同法洗脱，用5ml量瓶收集洗脱液至刻度，摇匀。分别精密量取该洗脱液与含量测定项下的对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。洗脱液与对照品溶液色谱图中吗啡峰面积的比值应在0.97-1.03之间。
测定法 取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3:1）15ml与水5ml冲洗，再用ph值约为9的氨水溶液（取水适量，滴加氢试液至ph9）冲洗至流出液ph值约为9，待用。取本品约5g，研细（过五号筛），精密称取约1g，置200ml量瓶中，加5％醋酸溶液适量，超声处理30分钟使吗啡溶解，取出，放至室温，用5％醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液0.5ml，置上述固相萃取柱上，滴加氨试液适量使柱内溶液的ph值约为9（上样前另取同体积的续滤液预先调试，以确定滴加氨试液的量），摇匀，待溶剂滴尽后，用水20ml冲洗，加含20%甲醇的5%醋酸溶液洗脱，用5ml量瓶收集洗脱液至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取吗啡对照品适量，精密称定，用含20%甲醇的5%醋酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml约含吗啡0.05mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 |