背景[1-3]
人组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
人组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于组蛋白H3Ser10及H3Ser28磷酸化在人卵母细胞成熟及IVF/ICSI来源的早期胚胎发育过程中的变化研究
组蛋白磷酸化是组蛋白翻译后修饰(post translational modifications,PTMs)的一种,定义为组蛋白N-端氨基酸残基的磷酸化修饰。组蛋白翻译后修饰为一类常见的表观遗传修饰类型。组蛋白磷酸化与减数分裂和有丝分裂中的染色质凝缩、调节染色质功能、DNA损伤的修复、转录的抑制与激活等多种生物学功能相联系。组蛋白磷酸化修饰在哺乳动物卵母细胞的成熟及早期胚胎发育过程中起着十分重要的作用。
而对于哺乳动物组蛋白磷酸化来说,最具有代表意义的就是组蛋白H3Ser10(第10位丝氨酸)和H3Ser28(第28位丝氨酸)的磷酸化。但是,过去的很多组蛋白磷酸化修饰在卵母细胞减数分裂和胚胎发育过程中的功能相关性研究都集中在动物身上,比如小鼠、兔子以及猪等。而对于组蛋白磷酸化在人卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的变化并无相关研究。因此,研究旨在通过探究组蛋白磷酸化在人卵母细胞成熟及不同来源的早期胚胎发育过程中的变化方式,完善人类辅助生殖的相关基础研究,以期为寻找更好的筛选优质卵子、胚胎方法打下基础。
研究组蛋白H3Ser10及H3Ser28磷酸化在人类卵母细胞成熟和IVF/ICSI来源早期胚胎发育过程中的变化规律,完善人类辅助生殖技术相关基础研究。
参考文献
[1]Dynamics and dispensability of variant-specific histone H1 Lys-26/Ser-27 and Thr-165 post-translational modifications[J].Jean-Michel Terme,Lluís Millán-Ari?o,Regina Mayor,Neus Luque,Andrea Izquierdo-Bouldstridge,Alberto Bustillos,Cristina Sampaio,Jordi Canes,Isaura Font,Núria Sima,Mónica Sancho,Laura Torrente,Sonia Forcales,Alicia Roque,Pere Suau,Albert Jordan.FEBS Letters.2014
[2]Histone H3 phosphorylation–A versatile chromatin modification for different occasions[J].Anna Sawicka,Christian Seiser.Biochimie.2012(11)
[3]Structural Basis for the Recognition of Phosphorylated Histone H3 by the Survivin Subunit of the Chromosomal Passenger Complex[J].A.Arockia Jeyaprakash,Claire Basquin,Uma Jayachandran,Elena Conti.Structure.2011(11)
[4]Signals and Combinatorial Functions of Histone Modifications[J].Tamaki Suganuma,Jerry L.Workman.Annual Review of Biochemistry.2011
[5]马宁赵.组蛋白H3Ser10及H3Ser28磷酸化在人卵母细胞成熟及IVF/ICSI来源的早期胚胎发育过程中的变化研究[D].郑州大学,2017.