背景[1-3]
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法（ELISA）检测样本中人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)的含量。
原理：往预先包被人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于U1小核核糖核酸嵌合体核酶靶向抑制HCV表达的研究
以HCV作为靶标。因为HCV是RNA病毒，其基因组既可作为模板复制出子代RNA，同时又起mRNA的功能指导翻译病毒蛋白。这样，针对HCV RNA的特异U1-Rz就可在复制和翻译两个水平上抑制病毒。故以人类U1 snRNA作载体，将核酶序列替代了它的第三个茎-环区，构建出U1核酶嵌合体的原核及真核表达载体。选择该区作为替代区域是因为它不影响U1 snRNA在核内的准确定位及核内稳定性。
嵌入的核酶序列裂解位点在HCV基因组核心（C）区，第381位之后。HCV的高度易变已成共识，但相对而言，其5’非编码区（5’-NCR）与核心区上游具有相对保守性。所以选择C区作靶点，这样可保证所构建U1-Rz对绝大多数HCV毒株有作用。
同时以同序列的单独核酶作为对照，以观察二者在细胞内外对HCV RNA<WP=91>切割效率的差异。该试验的作用底物为HCV NCR和部分C区基因，它与荧光素酶基因（luc）构成了融合基因，插入到真核表达载体pCMV/T7中。
以luc表达的荧光素酶作为报告基因。先将携带U1-Rz、核酶及HCV基因的质粒pGEM-（U1-Rz）、pGEM-Rz及pCMV/T7-NCRCΔ-luc在体外转录，其中NCRC△-luc RNA以[α-32P]UTP标记；然后U1-Rz及核酶RNA分别与靶RNA混合，研究不同体积比和作用时间下二者对底物的切割效率，并在二者的效率之间进行比较。
经聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影发现U1-Rz RNA能较高效地裂解HCV RNA，与相同序列的核酶相比二者之间没有明显差别。二者的切割效率随着作用时间延长、核酶：靶RNA的比例增大而增加。
进一步以U1-核酶嵌合体以及核酶的真核表达载体pcDNA3.1（+）U1-Rz、pcDNA3.1（+）Rz分别pCMV/T7-NCRCΔ-luc通过脂质体介导共转染人肝癌细胞Huh7，在转染后48小时刮取细胞，制备细胞裂解液，取上清进行Western Blot及利用荧光素发光检测仪FLX800进行检测，
参考文献
[1]Mechanism of action of ribavirin in the combination treatment of chronic HCV infection[J].Johnson Y.N.Lau,Robert C.Tam,T.Jake Liang,Zhi Hong.Hepatology.2002(5)
[2]Interferon-γinhibits replication of subgenomic and genomic hepatitis C virus RNAs[J].Hepatology.2002(3)
[3]New therapeutic strategies for hepatitis C[J].Adrian M.Di Bisceglie,John McHutchison,Charles M.Rice.Hepatology.2002(1)
[4]In vitro models for hepatitis C[J].Ralf Bartenschlager.Virus Research.2002(1)
[5]王美霞.U_1小核核糖核酸嵌合体核酶靶向抑制HCV表达的研究[D].吉林大学,2004.