背景[1-3]
SGC7901是一种人胃腺癌细胞系，来源于一个淋巴结转移灶。这些细胞具有高致瘤性和高转移性，被广泛用于胃癌的生物学研究和实验中。SGC7901细胞具有上皮样形态，并呈现贴壁生长的特性。在培养条件下，这些细胞需要使用含有10%小牛血清的RPMI 1640培养基，并在95%的湿度、5%的CO2和37℃的条件下进行培养。
SGC7901细胞在胃癌研究中具有重要的应用价值。例如，可以通过将RASSF1A基因转染到SGC7901细胞中，观察该基因对胃癌细胞生长的影响，并探讨其作用机制。实验结果显示，RASSF1A基因可以抑制SGC7901细胞的增殖和克隆形成能力，并促进细胞凋亡。此外，RASSF1A基因还可以影响SGC7901细胞的细胞周期分布和DNA结合活性等生物学特性。
除了用于基因转染和表达谱分析等研究外，SGC7901细胞还可以用于药物筛选和疗效评估等实验。例如，可以通过将药物作用于SGC7901细胞，观察药物对细胞生长和凋亡的影响，从而评估药物的疗效和机制。此外，SGC7901细胞还可以用于研究胃癌的发病机制、信号转导和代谢途径等生物学过程。
SGC7901
SGC7901细胞培养操作
1)复苏SGC7901细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)SGC7901细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)SGC7901细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
SGC7901可以用于基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究八宝丹逆转胃癌多药耐药的作用机制
研究八宝丹(BBD)对胃癌耐药细胞多药耐药的逆转作用,并从药物外排、增殖、凋亡、自噬及其对PI3K/AKT/m TOR信号通路调控等方面系统地阐明BBD逆转胃癌多药耐药的作用机制,为进一步扩大BBD在临床上的开发及应用提供实验依据。
方法:体外培养胃癌细胞SGC7901及胃癌耐顺铂(DDP)细胞SGC7901/DDP;通过MTT法检测顺铂(DDP)、多柔比星(DOX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)等化疗药物对细胞活力的影响,并计算耐药指数(RI)。运用MTT法检测BBD对胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/DDP细胞活力的影响,用0.25 mg/m L及0.5 mg/m L的BBD联合不同浓度DDP、DOX、5-FU干预SGC7901/DDP细胞48 h,并计算其IC50及逆转倍数(RF)。
采用荧光显微镜观察BBD对SGC7901/DDP细胞内DOX和罗丹明(Rho123)蓄积的影响。运用集落形成和流式细胞术检测BBD对SGC7901/DDP细胞增殖及周期分布的影响。运用DAPI和Annxin V/PI检测BBD对SGC7901/DDP细胞凋亡的影响。运用荧光显微镜和流式细胞术检测BBD对SGC7901/DDP细胞自噬的影响,并采用3-MA自噬早期抑制、氯喹(CQ)自噬晚期抑制剂干预进一步验证自噬。
采用Western Blot检测BBD对SGC7901/DDP细胞药物外排相关因子(ABCB1、ABCC1、ABCG2)、细胞增殖调控因子(Survivin、Cyclin D1、CDK4、p21)、细胞凋亡调控因子(Bcl-2、Bax、caspase-3、cleave-caspase-3)、自噬相关因子(LC3、p62、Beclin 1)的表达。采用Western Blot检测BBD和740Y-P对SGC7901/DDP细胞PI3K/AKT/m TOR信号通路活化的影响。结果:SGC7901/DDP细胞具有多药耐药性,对DDP、DOX和5-FU的耐药指数(RI)分别为1.86、1.501和47.70(RI>1.5)。
BBD具有逆转SGC7901/DDP细胞的多药耐药作用,0.25 mg/m L及0.5 mg/m L的BBD对DDP、DOX、5-FU的逆转指数(RF)分别为1.51、4.34、3.14和1.55、4.68、3.56(RF>1.5)。BBD增加SGC7901/DDP细胞内DOX和Rho123的蓄积,减少药物的外排,下调ABCB1、ABCC1、ABCG2的蛋白表达。BBD抑制SGC7901/DDP细胞的增殖,抑制细胞的集落形成和减少S期细胞比例,阻滞细胞于G0/G1期,下调Survivin、Cyclin D1、CDK4表达及上调p21的表达。
BBD可诱导SGC7901/DDP细胞凋亡,上调cleaved-caspase-3/caspase-3、Bax/Bcl-2的蛋白表达比例。BBD能促进SGC7901/DDP细胞自噬,上调LC3Ⅱ/Ⅰ的比值、Beclin1表达及下调p62表达;同时,3-MA(自噬早期抑制剂)、CQ(自噬晚期抑制剂)也进一步证实BBD具有促进SGC7901/DDP细胞自噬的作用。BBD降低p-PI3K、p-AKT、p-m TOR蛋白的表达,抑制PI3K/AKT/m TOR通路活化;同时,PI3K激动剂(740Y-P)也进一步揭示BBD抑制了PI3K/AKT/m TOR信号通路的活化。
结论:BBD具有逆转胃癌耐药SGC7901细胞多药耐药的作用和抑制胃癌耐药SGC7901细胞药物外排、增殖、诱导凋亡、促进自噬的作用,BBD抑制胃癌多药耐药细胞PI3K/AKT/m TOR信号通路活化是其重要作用机制之一。
参考文献
[1]Berberine Improves Chemo-Sensitivity to Cisplatin by Enhancing Cell Apoptosis and Repressing PI3K/AKT/mTOR Signaling Pathway in Gastric Cancer[J].Kou Yingying;Tong Bending;Wu Weiqing;Liao Xiangqing;Zhao Min.Frontiers in Pharmacology,2020
[2]Artesunate Impairs Growth in Cisplatin-Resistant Bladder Cancer Cells by Cell Cycle Arrest,Apoptosis and Autophagy Induction.[J].Zhao Fuguang;Vakhrusheva Olesya;Markowitsch Sascha D;Slade Kimberly S;Tsaur Igor;Cinatl Jindrich;Michaelis Martin;Efferth Thomas;Haferkamp Axel;Juengel Eva.Cells,2020
[3]Knockdown of PDIA6 Inhibits Cell Proliferation and Enhances the Chemosensitivity in Gastric Cancer Cells.[J].Yan Chao;Song Xiaolei;Wang Su;Wang Jinhai;Li Lu.Cancer management and research,2020
[4]PI3K/AKT pathway as a key link modulates the multidrug resistance of cancers.[J]
[5]兰炜兰.基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究八宝丹逆转胃癌多药耐药的作用机制[D].福建中医药大学,2021