简介
5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠（BCIP）是一种广泛应用于生物化学和分子生物学领域的显色底物，尤其作为碱性磷酸酶的常用底物[1]。其在碱性磷酸酶的催化下水解，释放出磷酸基团并生成5-溴-4-氯-3-吲哚（BCI），后者经氧化后与硝基蓝四氮唑（NBT）等氧化剂结合，形成不溶性的蓝色或紫色沉淀。这一特性使其成为免疫印迹（Western blot）、原位杂交和酶联免疫吸附试验等检测技术中信号放大与定位的关键试剂。此外，5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠具有高灵敏度和低背景干扰的特点，适用于低丰度靶标的可视化分析[1-2]。
5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠的化学性质
化学性质
5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠为浅黄色结晶粉末，易溶于水或缓冲溶液，微溶于有机溶剂（如乙醇）。其稳定性受pH和温度影响显著：在碱性环境（pH 8.0-10.0）中活性最佳，酸性条件下易分解；建议储存于-20°C避光干燥环境以延长保质期。5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠的显色反应依赖于酶促水解和氧化偶联两步反应：首先，碱性磷酸酶将其磷酸酯键断裂生成中间体BCI；随后，BCI在氧气或氧化剂（如NBT）存在下发生二聚化，形成深色靛蓝类化合物[2-3]。该反应具有高度特异性，显色强度与酶活性呈正相关，可通过分光光度法或成像系统定量分析。
安全性
5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠属于刺激性化学物质，需严格遵守实验室安全规范。直接接触可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，长期暴露或吸入粉尘可能导致过敏反应。操作时应佩戴防护手套、护目镜及口罩，并在通风橱中进行称量与配制。若发生接触，需立即用大量清水冲洗受影响部位，必要时就医。5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠对环境有一定危害，废弃溶液需按危险化学品处理，避免直接排入下水道。
参考文献
[1]Waldrop III A A, Fellers J, Vary C P H. Chemiluminescent determination of hydrogen peroxide with 9‐acridinecarbonylimidazole and use in measurement of glucose oxidase and alkaline phosphatase activity[J]. Luminescence: The journal of biological and chemical luminescence, 2000, 15(3): 169-182.
[2]Ikegami T, Arakawa H, Maeda M, et al. Chemiluminescent enzyme immunoassay using an alkaline phosphatase label and an indolyl phosphate substrate[J]. Analytical sciences, 1994, 10(5): 831-834.
[3]Tsuji A, Maeda M, Arakawa H. Recent advances of chemiluminescent and bioluminescent assay[J]. SEIBUTSU BUTSURI KAGAKU, 1995, 39(6): 301-309.