5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠是一种重要的生化试剂，浅黄色或浅灰色结晶粉末，广泛应用于生物化学与分子生物学领域，主要作为碱性磷酸酶的显色底物。
制备方法
Dozois, Charles等人研究了5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠的制备过程：本发明涉及5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸二钠盐的制备。具体而言，该制备方法包括以下步骤：(1) 吲哚与乙酸酐反应，生成1-(1H-吲哚-1-基)乙烷-1-酮；(2) 步骤(1)中得到的产物与叔丁基过氧化氢反应，生成1-(3-羟基-1H-吲哚-1-基)乙烷-1-酮； (3) 将步骤(2)中得到的产物与N-氯琥珀酰亚胺反应，生成1-(4-氯-3-羟基-1H-吲哚-1-基)乙酮。此外，(4) 将步骤(3)中得到的产物与N-溴琥珀酰亚胺反应，生成1-(5-溴-4-氯-3-羟基-1H-吲哚-1-基)乙酮； (5) 将步骤(4)中得到的产物与氯氧化磷反应，制得[(1-乙酰基-5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-基)氧基]磷酰二氯； 以及 (6) 将步骤(5)中得到的产物与氢氧化钠反应，制得5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸二钠盐。该合成路线简单、反应条件温和、总收率高的特点；原料价格低廉且易于获得，从而降低了合成成本并有利于工业化生产。[1]
主要性质与用途
5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸钠易溶于水或缓冲溶液，在碱性环境中活性最佳。主要作为碱性磷酸酶的显色底物。在碱性磷酸酶的催化作用下，其磷酸酯键被水解，释放出的吲哚衍生物经氧化（常与硝基蓝四氮唑（NBT）联用）后形成不溶性的深蓝色或紫色沉淀。这一显色反应具有高灵敏度和低背景干扰的特点，使其成为多种检测技术的关键试剂：（1）免疫印迹：用于蛋白质检测；（2）原位杂交与免疫组化：用于核酸或抗原的定位。（3）酶联免疫吸附试验：用于信号放大与可视化。（4）其他形式：该化合物也存在对甲苯胺盐等形式，其水溶性钠盐形式更便于在免疫印迹等实验中使用。
参考文献
[1] EVAH Avian Technology Inc. etal Genetically modified bacteria having stable mutations without requirement of antibiotic markers, and systems and methods for generating same World Intellectual Property Organization, WO2025151964 A1 2025-07-24