双(2-氰乙基)-N,N-二异丙基亚磷酰胺是一个无色液体有机磷化合物。通常用作核酸化学合成中的重要试剂。它可以用作DNA和RNA合成中的亚磷酰化试剂，也可用于固相合成反应中。
合成应用
1、专利CN202211394746.6实施例3的步骤8)将G7溶解在4L二氯甲烷中,室温下将双(2-氰乙基)-N,N-二异丙基亚磷酰胺(1.5eq.)和四氮唑(1.5eq.)加入到反应液中室温搅拌3小时,TLC监测反应结束后,将1.2eq.的碘吡啶溶液加入到反应液中。TLC监测反应结束后反应液分别用5%的硫代硫酸钠溶液,饱和碳酸氢钠溶液,饱和食盐水洗涤后将有机相浓缩。粗品溶解在10倍体积的甲醇/浓氨水(1:1)中,室温反应14小时,监测反应,反应结束后浓缩,粗品装载到DEAESephadex柱上,使用0-1.0M的TEAB洗脱液线性梯度洗脱。浓缩得中间体G。反应路线流程，如下方方程式[1]。
2、专利CN202310283482.5提供了一种花菁类荧光标记物、其合成方法和应用,该标记物的核苷单元与五甲川类花菁之间以碳链连接,极大提高了化学稳定性,实现了一类新型荧光探针的系列化制备。其中，实施例2步骤b):将1.1g化合物3溶于10mL无水二氯甲烷中,冰水浴下加入2.1mL无水二异丙基乙基胺和1.2g双(2-氰乙基)-N,N-二异丙基亚磷酰胺，室温下避光搅拌过夜。反应结束后浓缩除去溶剂,加入50mL乙酸乙酯和50mL水洗涤,有机相再以70mL水洗涤。粗产品滤除干燥剂后浓缩至2-20mL,氮气保护下逐滴加入到700mL正庚烷中,滴加同时搅拌。过滤收集固体,得到深蓝色粉末(化合物4)670mg,收率55%[2]。
3、专利CN202310091020.3实施例2步骤3，配28mL的四氮唑的乙腈溶液(0.4mmol/mL)待用。将化合物2-4(2.8g)加入到上述溶液中,然后将化合物2-5双(2-氰乙基)-N,N-二异丙基亚磷酰胺(2.26g)在室温25℃下加入到该溶液中,置换氨气三次,反应液在室温25℃下搅拌1小时。点板监测显示反应完全。反应液在冰水浴下冷却到10℃以下,滴加碘的吡啶/四氢呋喃/水的溶液(0.5mmol/ml,吡啶:四氢呋喃:水=1:8:1)直到反应液不褪色,点板监测显示氧化反应完成。随后反应液中加入10mL饱和亚硫酸钠水溶液淬灭,再加水稀释。用乙酸乙酯萃取三次,合并有机相后用无水硫酸钠干燥,过滤。加适量硅胶和DCM拌样、纯化(40g正相柱,EA,10min,DCM:MeOH,10-20%20min,流速30ml/min)。浓缩得到白色泡沫状固体2-6(3.1g,93.5%收率)[3]。
参考文献
[1]江苏申基生物科技有限公司. 一种核糖环修饰的mRNA帽类似物及其制备方法和应用:CN202211394746.6[P]. 2023-05-23.
[2]北京超精核酸科技有限公司. 花菁类荧光标记物、其合成方法和应用:CN202310283482.5[P]. 2023-06-23.
[3]深圳瑞吉生物科技有限公司,武汉瑞佶生物科技有限公司. 一种用于核酸的5’端加帽的化合物及其应用:CN202310091020.3[P]. 2024-07-23.