背景[1-3]
犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测犬细小病毒(CPV)的DNA，用于犬细小病毒(CPV)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性DNA片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
犬细小病毒（Canine Parvovirus,CPV）可引起犬的剧烈呕吐、出血性肠炎、脱水、白细胞减少和心肌炎等症状。临床上犬细小病毒病可分为肠炎型和心肌炎型，对犬造成很大危害。CPV有3种亚型，主要是在VP2蛋白上有基因差异，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c。感染CPV的犬主要通过粪便向外排毒，因此粪便是犬间传递感染的主要传染源。CPV常规检测方法主要有病毒分离鉴定、血凝和血凝抑制试验、ELISA和PCR等方法。PCR法灵敏度高、特异性强、操作简单，已被广泛用于CPV诊断。
犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)
技术原理
犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)采用TaqMan一步法荧光定量PCR技术，结合特异性扩增引物对目的基因进行体外扩增，本试剂盒具有灵敏性高、特异性强、反应时间短等优点，操作简便，污染概率低等特点。
Real Time PCR(qPCR)，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术，是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、精确以及使用简便等优点，现已发展成为分子生物学研究中的重要工具。
产品特点
特异性好：采用TaqMan荧光探针法进行扩增。
灵敏度高：检测灵敏度可达500copies/uL以下。
操作简便：采用一步法荧光定量PCR进行扩增，逆转录步骤与PCR扩增在一管反应液中完成。
适用仪器
ABI、安捷伦、Roche、博日，朗基，柏恒等梯度PCR仪。
自备：无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
操作步骤
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定；
应用[4][5]
犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)可以用于犬细小、犬瘟热和犬冠状病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立和应用
犬瘟热病毒（Canine distemper Virus,CDV）、犬冠状病毒（Canine coronavirus,CCoV）和犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）是犬最为常见的传染病,均具有较强的传染性和较高的致死率,无明显的季节影响,一年四季均可感染。并且在临床中三种病毒间易发生混合感染,严重危害了犬类健康。荧光定量PCR技术具备高灵敏度与强特异性,多重PCR检测方法可以同时检测多种病毒,节省时间和成本。
研究构建了一种能够同时检测这三种病原的多重荧光定量PCR方法,具体研究内容如下:（一）CPV、CDV和CCoV三重PCR检测方法的建立本研究根据CPV的VP2基因序列、CDV的N基因序列和CCoV的ORF1b基因序列保守区来设计引物,将各病原的PCR扩增产物分别与T载体连接,成功构建了重组质粒标准品p MD19-T-CPV、p MD19-T-CDV和p MD19-T-CCoV。通过犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)对引物、探针和退火温度的优化成功构建了CPV、CDV和CCoV三重PCR检测方法。特异性检测结果显示,这三对引物仅针对特定病原产生反应,与其他病原不存在任何交叉反应。CPV、CDV和CCoV的敏感性分别为2.69×10～2copies/μL、2.78×10～2copies/μL和2.57×10～2copies/μL。该方法具有良好的特异性和敏感性,适用于临床病料的检测。（二）CPV、CDV和CCoV三重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立同样在三种病原的基因序列保守区域设计特异性引物和探针,以上述构建的质粒标准品为模板,经过犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)优化成功建立了用于CPV、CDV和CCoV的三重TaqMan荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性以及重复性这三个关键性指标进行检测。特异性检测结果显示这三对引物仅针对特定病原产生反应,与其他病原不存在任何交叉反应。敏感性结果显示CPV、CDV和CCoV的最低检测限分别为2.69copies/μL、2.78 copies/μL和2.57 copies/μL。标准曲线的R2值均高于0.99,表明该方法具有良好的线性关系。重复性结果显示CPV、CDV和CCoV组内CV值均小于2.7%,组间CV值均小于4.1%。通过对68份临床样本检测发现,相较于胶体金试纸卡与传统PCR技术,本研究建立的三重TaqMan荧光定量PCR法对CPV、CDV和CCoV三种病原的检测具有更高的准确性和敏感性。
参考文献
[1]Universal peptide-based potential vaccine design against canine distemper virus(CDV)using a vaccinomic approach[J].Santiago Rendon Marin;Julián Ruíz Saenz.Scientific Reports.2024
[2]Development of multiplex real-time PCR for simultaneous detection of SARS-CoV-2,CCoV,and FIPV[J].Yan Liu;Zhen Zhu;Jige Du;Xiaojie Zhu;Chenfan Pan;Chunsheng Yin;Weidong Sun.Frontiers in Veterinary Science.2024
[3]Canine distemper virus(CDV)-neutralizing activities of an anti-CDV canine-derived single-chain variable antibody fragment 4-15(scFv 4-15)screened by phage display technology[J].Li Yuan;Song Jingge;Jiang Sheng;Yang Yaqi;Han Yanyan;Zhong Linhan;Zhou Jiaying;Wang Mei;Song Houhui;Xu Yigang.International Journal of Biological Macromolecules.2024
[4]Canine Distemper Virus(CDV)in Grey Wolf(Canis lupus)in Fars Province of Iran.[J].Ehsan Saeidi;Foozhan Kheradmand.Veterinaria italiana.2023
[5]卜琪.犬细小、犬瘟热和犬冠状病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立和应用[D].河南科技学院,2025.