背景[1-3]
猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒(荧光-PCR法)适用于Porcine Circovirus 2猪圆环病毒2型(PCV-2)的DNA，用于Porcine Circovirus 2猪圆环病毒2型(PCV-2)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性DNA片段标准品作为阳性对照，仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。
猪是猪圆环病毒2型(PCV-2)的天然宿主，各种年龄、不同性别的猪都可感染，但并不都能表现出临诊症状。病猪和带毒猪是主要的传染源。
经口腔和鼻内实验感染新生仔猪能复制出典型的猪断奶后多系统衰竭综合征，易感猪与发病猪接触后引发猪断奶后多系统衰竭综合征，证实猪圆环病毒2型(PCV-2)可在猪群中水平传播。已有证据表明猪圆环病毒2型(PCV-2)可通过胎盘垂直传播。
由PCV2感染所致的猪断奶后多系统衰竭综合征主要发生在哺乳期和保育期的仔猪，尤其是5～12周龄的仔猪，一般于断奶后2～3天或1周开始发病，急性发病猪群中，病死率可达10%。
猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒(荧光-PCR法)
技术原理
猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒采用SYBR Green一步法荧光定量PCR技术，结合特异性扩增引物对目的基因进行体外扩增，本试剂盒具有灵敏性高、特异性强、反应时间短等优点，操作简便，污染概率低等特点。
产品特点
特异性好：采用SYBR Green荧光染料法进行扩增。
灵敏度高：检测灵敏度可达500copies/uL以下。
操作简便：采用一步法荧光定量PCR进行扩增，逆转录步骤与PCR扩增在一管反应液中完成。
适用仪器
ABI、安捷伦、Roche、博日，天隆，宏石，鲲鹏等荧光定量PCR仪。
自备：无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
操作步骤
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
6.质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7.产品性能指标
阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。
最低检测限：检测灵敏度可达500copies/uL以下。
精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于3%。
应用[4][5]
猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒(荧光-PCR法)可以用于猪圆环病毒2型的分离鉴定及六种PCV2商品疫苗的免疫效果评价
研究通过小鼠动物模型评价不同类型PCV2疫苗的免疫效果。1、猪圆环病毒2型的分离鉴定本研究利用猪肾细胞（PK15细胞）对江西某猪场疑似PMWS患病猪的肾脏组织病料进行病毒分离,通过PCR鉴定和全基因组测序确定该分离毒株为猪圆环病毒2型,命名为PCV2-ZQP株。全基因组测序结果显示,该毒株全基因组全长1768 bp,ORF1基因全长945 bp,ORF2基因全长702 bp。与Gen Bank中收录的不同基因型PCV2毒株进行同源性及遗传进化分析,发现该分离株属于PCV2d型,与PCV2参考毒株全基因组核苷酸序列同源性在92.8%～99.9%;与PCV2参考毒株ORF1基因核苷酸序列同源性在97.1%～100%;与PCV2参考毒株ORF2基因核苷酸序列同源性在84.3%～99.6%。2、猪圆环病毒2型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立本研究根据Gen Bank中收录的猪圆环病毒2型ORF1基因序列（登录号:HM038017.1）设计合成了特异性引物和探针,通过SYBR Green I染料法以及TaqMan探针法对引物的筛选,且对比猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒(荧光-PCR法)荧光定量PCR反应条件进行优化,成功建立了一种PCV2 TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法。结果表明当模板浓度在7×10～2～7×10～7拷贝/μL时,模板浓度与阈值循环数（Ct值）具有良好的线性关系;该方法最低检出量为7×10～0拷贝/μL;该方法与PRV、Po RV、PRRSV以及PEDV均无特异性扩增;该方法组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好。
本研究基于猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸试剂盒(荧光-PCR法)建立的荧光定量PCR检测方法可用于定量检测PCV2核酸含量。
结果显示,疫苗B免疫后2周即可检测到特异性抗体,其他组疫苗无法检出,第4周到达免疫高峰,并保持高抗体水平直至实验结束,显著优于其他组疫苗。六种不同PCV2商品疫苗免疫小鼠后抗体水平排序为疫苗B>疫苗C>疫苗D>疫苗E>疫苗F>疫苗A。PCV2商品疫苗免疫小鼠后4周,以PCV2-ZQP毒株作为毒种进行免疫攻毒试验,按照1×1011拷贝数/只的攻毒剂量腹腔注射病毒液,感染15天后宰杀小鼠,采用本研究建立的PCV2荧光定量PCR方法测定小鼠肺脏中PCV2病毒载量,比较不同疫苗的免疫保护效果。结果显示,未免疫攻毒小鼠后PCV2病毒载量为1.02×10～7拷贝数/0.1g肺脏,疫苗A～疫苗F免疫攻毒小鼠后PCV2病毒载量依次为2.88×10～6拷贝数/0.1g肺脏、2.72×10～6拷贝数/0.1g肺脏、3.5×10～6拷贝数/0.1g肺脏、7.89×10～6拷贝数/0.1g肺脏、4.05×10～6拷贝数/0.1g肺脏、4.31×10～6拷贝数/0.1g肺脏,其中疫苗B的免疫保护效果最好。六种不同PCV2商品疫苗的免疫保护效果排序为疫苗B>疫苗A>疫苗C>疫苗E>疫苗F>疫苗D。
参考文献
[1]Porcine Circovirus Type 2 Vaccines:Commercial Application and Research Advances[J].Guo Jinshuo;Hou Lei;Zhou Jianwei;Wang Dedong;Cui Yongqiu;Feng Xufei;Liu Jue.Viruses.2022
[2]Epidemiological Survey of Four Reproductive Disorder Associated Viruses of Sows in Hunan Province during 2019–2021[J].Tang Qiwu;Ge Lingrui;Tan Shengguo;Zhang Hai;Yang Yu;Zhang Lei;Deng Zaofu.Veterinary Sciences.2022
[3]Discriminating the eight genotypes of the porcine circovirus type 2 with TaqMan-based real-time PCR[J].Link Ellen Kathrin;Eddicks Matthias;Nan Liangliang;Ritzmann Mathias;Sutter Gerd;Fux Robert.Virology Journal.2021
[4]Detection and genetic characterization of porcine circovirus 4(PCV4)in Guangxi,China[J].Sun Wenchao;Du Qian;Han Zhixiao;Bi Jinshan;Lan Tian;Wang Wei;Zheng Min.Gene.2020
[5]余文洋.猪圆环病毒2型的分离鉴定及六种PCV2商品疫苗的免疫效果评价[D].江西农业大学,2023.