研究背景
霍乱毒素（Cholera Toxin）源于霍乱弧菌，由A、B两种亚基组成。A亚基是一种ADP-核糖转移酶，通过破坏G蛋白信号传导致使细胞脱水。而霍乱毒素B亚基 (2-8℃)（Cholera Toxin Subunit B，CTB) 通过与神经节苷脂GM1的戊多糖链结合附于细胞表面，可被轴突末端吸收并逆向运输至胞体，进而特异高效地逆行标记神经细胞，目前常被用作无毒逆行示踪剂。此外，该物质具有良好免疫佐剂活性，黏膜途径免疫其效果更佳[1]。特别地，霍乱毒素B亚基 (2-8℃)能作为诱导口服耐受强大的黏膜运载系统，还可以有效地减少自身抗原在口服时剂量，这些都暗示其耦联自身抗原不仅使口服耐受防治Ⅰ型糖尿病等自身免疫性疾病更具有实际应用价值，还具有潜在的治疗前景[2]。
制备方法
生物技术制药工程公开了一种霍乱毒素B亚基 (2-8℃)的制法。该方法通过家蚕杆状病毒表达系统(Bombyx mori Nuclear polyhedrosis Virus)重组带有CTB基因，获得重组病毒。将该重组病毒接种家蚕幼虫，蛹进行表达，经分离纯化，冷冻干燥，制成口服药物，经动物试验，在小鼠体内产生较强的抗体。以家蚕幼虫，蛹中表达CTB作为佐剂能显著增强rHBsAg，丙肝抗原，IBDV VP2抗原的口服免疫效果，显著增强胰岛素，rhGM-SCF口服治疗效果，成为一种制备抗霍乱菌药物和佐剂的新型方法。与现有技术相比，上述制备霍乱毒素B亚基 (2-8℃)的方法原料易得，生产成本低，治疗效果良好，具有十分重大的市场开发应用前景[3]。
应用
无机材料结合生物大分子的技术领域公开了一种Fe3O4@SiO2与霍乱毒素B亚基 (2-8℃)的偶联方法。首先，用SiO2在表面修饰Fe3O4，再通过偶联剂APTES和NHS、EDC·HCl，将修饰后的Fe3O4与霍乱毒素B亚基 (2-8℃)偶联，能有效将二者结合起来，制备得到一种具有较好生物相容性的T2造影剂[4]。
此外，文献还报道了一种幽门螺旋杆菌多表位疫苗，其活性成分是一条多肽，主要由幽门螺旋杆菌尿素酶A，B双亚基的Th和B细胞抗原表位的多拷贝体以及黏膜免疫佐剂霍乱毒素B亚基 (2-8℃)构成。具体地，通过基因合成技术合成一个人工基因，其包含有尿素酶A，B双亚基的Th和B细胞抗原表位多拷贝体的基因序列；然后将该人工基因与霍乱毒素B亚基 (2-8℃)的基因序列相偶联，形成一个融合基因。利用大肠杆菌原核表达系统表达该融合基因，经蛋白纯化后，获得幽门螺旋杆菌多表位疫苗。该幽门螺旋杆菌多表位疫苗能够诱发机体产生针对尿素酶A，B双亚基的T细胞免疫应答和高滴度特异性抗体体液免疫应答，可用于预防和治疗幽门螺旋杆菌感染相关性疾病[5]。
有关研究
对以霍乱毒素B亚基为载体蛋白的重组疟疾多价抗原在小鼠及恒河猴 中的免疫原性及对相应疟原虫感染的免疫保护作用进行研究。结果表明：该抗原免疫小鼠后，对约氏疟子孢子攻击的保护率在50%左右。恒河猴免疫后用 1×108食蟹疟裂殖子攻击，对照组2只动物在攻击后4d感染，感染持续30d以上。免疫组2只动物中，两只动物在感染6～7d后完全恢复，且1只推迟 3d感染，说明该抗原具有免疫保护作用[6]。
此外，在A组轮状病毒VP6与霍乱毒素B亚基 (2-8℃)融合蛋白在大肠杆菌中的表达及生物活性分析研究中，利用霍乱毒素B亚基 (2-8℃)的免疫载体作用，将轮状病毒相关抗原引入口服免疫体系，可激起有效的粘膜免疫反应。其中，霍乱毒素B亚基 (2-8℃)基因与A组轮状病毒地方株T114VP6全基因的融合，并在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中进行了融合蛋白的表达[7]。
参考文献
[1]郭芸芸.支原体纤毛黏附因子P97,鞭毛蛋白-CTB联合使用增强FMD灭活疫苗免疫原性的研究[D].西藏大学,2019.
[2]周灵娟.家蚕幼虫表达的霍乱毒素B亚基与人胰岛素B链融合蛋白的功能研究[D].浙江大学,2007.
[3]金勇丰,张耀洲,吴祥甫.霍乱毒素b亚基的制法:CN01144502.5[P].
[4]王华倩,杨静茹,纪美琪,等.一种四氧化三铁与霍乱毒素B亚基偶联的制备方法及其应用:CN202110947328.4[P].
[5]奚涛,郭乐,邢莹莹,等.一种新型幽门螺旋杆菌多表位疫苗及其制备方法:CN201110064596.8[P].
[6]曹诚,李平,石成华,等.重组霍乱毒素B亚基与疟原虫多表位融合蛋白的免疫保护作用研究[J].生物工程学报, 2000, 16(003):333-336.DOI:10.1007/BF02983442.
[7]郭婷夏,方荣祥,李国华,等.A组轮状病毒VP6与霍乱毒素B亚基融合蛋白在大肠杆菌中的表达及生物活性分析[J].生物工程学报, 2001, 17(6):5.DOI:10.3321/j.issn:1000-3061.2001.06.006.