研究背景
SPIC蛋白是在沙门氏菌致病岛 2 (SPI-2) 内编码的毒力因子，通过抑制宿主细胞吞噬体与溶酶体融合，促进细菌在细胞内存活，进而影响生物体免疫反应、生长繁殖等生物学过程。因此，研究SPIC蛋白的生物学功能及其在沙门菌致病中的作用机制，对于深入了解沙门菌致病机理、发展有效的控制策略具有重要意义。SPIC抗体是一类针对SPIC蛋白的特异性免疫球蛋白，商售产品一般表现为储存于缓冲液的液体，其研究背景与SPIC蛋白的功能密切相关[1]。
研制
沙门菌种类繁多，已知的血清型已有2600多种，严重影响人类健康和畜牧业的发展，对沙门菌的检测和诊断是防控沙门菌病的重要手段之一。由沙门菌毒力岛2编码的效应蛋白SPIC对于沙门菌在宿主吞噬性细胞内的存活起重要作用，它是在沙门菌中发现的第一个宿主转运干扰蛋白，能被SPI-2 T3SS导出细菌并进入宿主细胞胞质中，并与宿主细胞的蛋白互作，抑制吞噬体和溶酶体的融合。单克隆抗体技术作为现代生命科学研究的重要工具，在基因和蛋白质的结构与功能研究方面以及免疫学诊断方面有着不可或缺的作用。因此，筛选具备沙门菌特异性阻断效果的单克隆抗体（如SPIC抗体 ），研发竞争ELISA检测试剂(盒)，为沙门菌的检测和沙门菌病的诊断提供快速，有效的技术手段势在必行。
具体地，以纯化的重组融合蛋白rHis-SPIC为免疫原，免疫6-8周龄的BALB/c小鼠，取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，以纯化的重组融合蛋白rGST-SpiC为检测原，经过间接ELISA检测和多次亚克隆获得能稳定分泌SPIC抗体的杂交瘤细胞株。对得到的SPIC抗体进行腹水效价测定，特异性研究表明，单抗均可特异性识别原核表达系统表达的SPIC蛋白，具有较好的特异性和免疫反应性，为SPIC的相关基础研究提供了重要试剂[2]。
应用研究
通过上述过程制得SPIC抗体后，经蛋白包被浓度，抗体稀释浓度，血清稀释度，最适封闭液，竞争时间等条件的优化建立灵敏度高，特异性好的竞争ELISA方法，并利用该方法对感染沙门菌的鸡血清进行检测。以149份鸡血清为检测材料，结果显示，共检出121份阳性样品，检出率为81.21%，阴性样品28份，检出率为18.79%。这也就意味着，以所得单抗为基础建立的竞争ELISA方法具有简单，快速，灵敏度高等特点，可以被广泛用于鸡血清中沙门菌抗体水平的检测，该实验结果对于沙门菌检测和沙门菌病的诊断研究以及各种新型疫苗和诊断试剂的研发方面具有重要应用价值[2]。
参考文献
[1]Kei-ichi Uchiya,Toshiaki Nikai,Salmonella virulence factor SpiC is involved in expression of flagellin protein and mediates activation of the signal transduction pathways in macrophages.DOI:10.1099/mic.0.2008/021667-0.
[2]钱珊珊.沙门菌SpiC蛋白单克隆抗体的研制与初步应用[D].扬州大学,2015.DOI:10.7666/d.Y2909175.