介绍
人APELIN蛋白(APLN)ELISA检测试剂盒可以用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清等样本中APLN蛋白含量，在 450nm 波长下测定吸光度，结合标准曲线计算样本中 APLN 浓度。其灵敏度可达45 pg/mL（双抗体夹心法）至8.25 pg/mL（竞争法），特异性强，不与APLN类似物发生交叉反应。
人APELIN蛋白(APLN)ELISA检测试剂盒
检测原理
人APELIN蛋白(APLN)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被有人 Apelin蛋白(APLN)捕获抗体的微孔中，依次加入样本、标准品、生物素标记的 检测抗体，HRP酶结合物，中间经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB在 过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样本中的人Apelin蛋白(APLN)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度（OD值），计算样本浓度。 灵敏度为60.5pg/mL，特异性：可检测样本中人的APLN，且与其类似物无明显交叉反应[1]。
样本处理及要求
血清：将收集于血清分离管的全血样本在室温放置2小时或2-8℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集样本，并将样本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响检测结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨或匀浆机研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清于人APELIN蛋白(APLN)ELISA检测试剂盒检测。
细胞裂解液：贴壁细胞用预冷PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用预冷PBS清洗3次，每1×10^6个细胞中加入150-200μLPBS重悬（推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可适当减少PBS体积）并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清于人APELIN蛋白(APLN)ELISA检测试剂盒检测[2]。
参考文献
[1]Ma Y ,Ding Y ,Song X , et al.Structure-guided discovery of a single-domain antibody agonist against human apelin receptor[J].Science Advances,2020,6(3):eaax7379.
[2]Zhen E Y, Higgs R E, Gutierrez J A. Pyroglutamyl apelin-13 identified as the major apelin isoform in human plasma[J]. Analytical Biochemistry, 2013, 442(1): 1-9. https://doi.org/10.1016/j.ab.2013.07.006.