益肾补血胶囊是一种中药复方制剂，由淫羊藿、补骨脂，龙血竭、杜仲等中药制成的胶囊，具有益肾补血、祛瘀定痛，止血生肌之功效。补骨脂是方中臣药，具有温肾助阳、纳气、止泻的作用，文献中含有补骨脂制剂的质量控制多用HPLC测定异补骨脂素的含量，本文参考中国药典(2005年版一部)补骨脂项下含量测定方法，建立了一种方便快捷、准确灵敏的反相HPLC法测定益肾补血胶囊中异补骨脂素的含量。
测定方法[1]
1、色谱条件
Agilent C18色谱柱(4.6mmX250mm,5um),以甲醇-水(52:48)为流动相，进样量:10ul，流速为1.0ml/min，检测波长246nm，柱温:室温，理论塔板数以异补骨脂素峰计不低于5000，且阴性对照溶液无干扰。
2、溶液的制备
①对照品溶液的制备:称取异补骨脂素对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释，摇匀，即得浓度为0.0938mg/ml的对照品储备液。取对照品储备液1.0ml至5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，0.2um微孔滤膜滤过，即得对照品溶液(浓度为0.01876mg/ml)。②供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取细粉约0.5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密移入25ml甲醇，精密称重，超声30min，取出，放冷至室温，以甲醇补足重量，摇匀，0.2um微孔滤膜滤过，即得。③阴性对照溶液的制备:取除补骨脂以外的其余药味，按工艺制成缺味样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
3、线性关系与最低检测限
分别精密吸取异补骨脂素对照品溶液2ul、6ul、10ul、14ul、18ul、22ul注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积Y为纵坐标，异补骨脂素进祥量(ug)为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=8021X+15.999,r2=0.9999(n=6)，线性范围为0.03752ug~0.41272ug。在该色谱条件下，以信噪比为3计，异补骨脂素的最低检出限为0.014ug。
4、精密度试验
精密吸取同一样品的供试品液10ul，注入液相色谱仪,重复进样6次,记录峰面积,计算日内RSD为1.70%(n=6)。
5、稳定性
试验取同一供试品溶液，在室温下每间隔一定时间进样10ul，测定峰面积，计算RSD为2.10%，实验表明异补骨脂素在所考察的12h内稳定，可满足日常测定的需要。
6、重复性试验
取同批样品6份，按正文含量测定项下的方法进行异补骨脂素含量测定，计算得该样品平均含量为0.064%，RSD为0.56%。
7、加样回收率试验
取同批已知含量的样品(异补骨脂素含量为0.064%)6份，精密称定，分别精密加入异补骨脂素对照品储备液(毎1ml中含异补骨脂素0.0938mg)2.0ml，按正文含量测定项下方法测定，结果平均加样回收率为103.01%,RSD为1.01%(n=6)。
8、样品测定
取样品(060828、070110、070706)，按拟定的含量测定项下的方法制备供试品溶液，精密吸取10ul，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，计算各批样品中异补骨脂素得含量。
参考文献
[1]颜仁梁,刘志刚,罗佳波. HPLC测定益肾补血胶囊中异补骨脂素含量[J]. 中国中医药现代远程教育,2008,6(11):1329-1330. DOI:10.3969/j.issn.1672-2779.2008.11.014.