简介
2，4-二硝基氟苯（FDNB）作为一种衍生试剂，在避光、60℃、碱性条件下能同时与一、二级氨基酸生成一种稳定的衍生物，对于定量测定比较简易，并且在360nm处有较强的紫外吸收、衍生反应条件易于控制、反应快速简单、衍生物稳定、易于保存、灵敏度高、检出限低，同时色谱分离时间短、重现性好、准确度高。因此，通常研究人员利用2，4-二硝基氟苯（FDNB）为柱前衍生剂，于360nm处测定不同品种的苜蓿和山黛豆样品中的甲硫氨酸，操作简单易行，选择性好，灵敏度高，具有很大的实用价值[1]。
2,4-二硝基氟苯的性状
含量测定
根据文献报道氨基酸的分析，按分离方法分可分为纸色谱法、离子交换色谱法、反相高效液相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法、气相色谱法等；按检测方法分可分为化学分析法、电化学方法、分光光度法等；按衍生反应的先后，可分为柱前衍生和柱后衍生法。由于氨基酸是一类化学性质相似的生物活性物质，在分析过程中，检测方法的灵敏度对分析的准确性起非常重要的作用。
2，4-二硝基氟苯（FDNB）作为衍生化试剂，利用柱前衍生-反相高效液相色谱法方便地测定了苜蓿和山黛豆样品中的甲硫氨酸。通过对FDNB和甲硫氨酸衍生化条件（时间、用量）的讨论，确定了衍生化反应的最佳反应条件。从线性关系、精密度、加标回收率等方面对柱前衍生高效液相色谱法进行了验证，表明该方法简便、快速、准确、选择性好、灵敏度高。通过对苜蓿和山黛豆样品中甲硫氨酸含量的比较，说明了该方法适合于植物样中甲硫氨酸的测定。具体测试方法如下：
实验采用Luna-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），40℃柱温，360nm检测，流速1.0mLmin⁻¹，进样20μL；流动相为乙腈-pH4.73醋酸钠缓冲液25:75。衍生前配制0.5molL⁻¹NaHCO₃、6.25mgmL⁻¹2,4-二硝基氟苯乙腈液、1.0mgmL⁻¹甲硫氨酸标准液及pH≈7的磷酸盐缓冲液，缓冲液由5.001g无水NaAc溶于1L水后加3.6mL冰醋酸再与乙腈75:25混合而成[1]。
参考文献
[1] 尚颖颖,杨玲娟. 2,4-二硝基氟苯柱前衍生测定植物样中的甲硫氨酸 [J]. 福建分析测试, 2023, 32 (02): 5-10.