概述
GHRELIN是一种的由28 个氨基酸组成的脑肠肽激素，是生长激素促泌素受体的内源性配体，主要由胃的一种内分泌细胞分泌，也分布于其他许多组织中，如下丘脑,垂体和胰腺等。GHRELIN与其特异性受体结合后，会产生一系列生物学效应，如刺激垂体前叶释放生长激素，增加采食，调节能量平衡，促进胃酸分泌和胃肠蠕动等作用。鉴于Ghrelin可能是新发现的下丘脑，垂体，胃之间内分泌调节的联系纽带，特异性作用于该物质的GHRELIN抗体具有重要的研究意义[1]。
制备研究
抗体(免疫球蛋白,Ig)是指机体受到外来抗原物质刺激后，B细胞识别抗原后活化，增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白[2]。GHRELIN是1999年由Kojima等在小鼠和人的胃内分泌细胞及下丘脑弓状核中发现的一种新的脑肠肽激素，是迄今发现的唯一生长激素释放激素受体(GHSR)的内源性配体，因其具有促进垂体前叶生长激素的分泌的作用而命名为GHRELIN。根据Genbank中检索猪prepro ghrelin mRNA序列，设计猪Ghrelin原核表达引物。通过RT-PCR技术扩增猪的Ghrelin cDNA，将其与pMD18-TVector连接，转化入大肠杆菌经鉴定正确后，回收目的片段与原核表达载体pET28a(+)相连接，构建猪Ghrelin的原核表达系统即可获得重组菌分泌的猪Ghrelin原核表达多肽。以纯化的包涵体蛋白与不完全福氏佐剂氢氧化铝佐剂混合研磨均匀后免疫新西兰大白兔，获取兔抗猪Ghrelin免疫血清，经Western-blot方法检测即可获得相应的GHRELIN抗体。这些研究将为GHRELIN各方面进一步的研究奠定了基础[3-4]。
应用
GHRELIN抗体主要用于检测和分析生长激素释放肽（GHRELIN）在生物样本中的表达，常见于免疫学实验中，例如酶联免疫吸附（ELISA）实验，用于定量检测血清、血浆或细胞培养上清中的GHRELIN浓度。 相应检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中GHRELIN 水平，用纯化的GHRELIN抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入GHRELIN，再与HRP标记的GHRELIN抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GHRELIN呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中GHRELIN的浓度[5]。
参考文献
[1]马勇江,叶远兰,张媛,等.脑肠肽激素Ghrelin及其在动物生产中的应用展望[J].家畜生态学报, 2006, 27(6):5.DOI:10.3969/j.issn.1673-1182.2006.06.057.
[2]张绍兰.鸡卵黄抗体研究进展[J].西南军医, 2008, 10(3):2.DOI:10.3969/j.issn.1672-7193.2008.03.078.
[3]陈锐,朱尤庆.脑肠肽Ghrelin的研究进展[J].武汉大学学报：医学版, 2010(3):4.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-2346.2012.09.026.
[4]刘洪.猪Ghrelin基因的克隆、原核表达及Ghrelin蛋白多克隆抗体的制备研究[D].华中农业大学,2009.DOI:CNKI:CDMD:2.2008.203519.
[5]中国化工仪器网.猪生长激素释放多肽(Ghrelin )ELISA试剂盒说明书[J].试验机.