技术背景
随着营养科学的发展,测定谷物、食品及饲料中的蛋白质、赖氨酸的含量需要一种准确、简易、快速、低消耗的分析方法来达到尽快的筛选出高蛋白、高赖氨酸的亲本材料。藏花橙G又称酸性橙-12，即6-羟基-5-(苯偶氮基)-2-萘磺酸,作为染色剂在着色法(简称DBC法)中的应用，不仅使作物蛋白质的分析和土壤中含氦元素与赖氨酸的测定工作变得简易、准确、快速,并成功地应用于麦类、玉米、高粱、小米、大豆和稻谷等作物蛋白质的分析,因而该化合物被引起了足够重视。
随着测定蛋白质、赖氨酸的DBC法的标准化和推广应用,对染色剂藏花橙G的需求量日益增加，不仅要研制出不含有色杂质的高含量试剂,而且要提供一个能批量生产的合理工艺,以满足国内市场需求。
制备方法
(1)磺化:在装有搅拌器、温度计、冷凝器的反应瓶中加入加入1305ml浓硫酸,水浴上加热至90℃,在搅拌下分批加入900gβ-萘酚,反应温度不超过90℃,加完后升温到100℃,搅拌1小时,降温至25℃,用10N氢氧化钠调PH=7.8,消耗3920ml氢氧化钠溶液,过滤析出的白色沉淀为粗品,用6000ml蒸馏水进行重结晶得到白色片状结晶为-萘酚-6-磺酸钠,置于干燥箱中干燥,温度不能超过110℃,干燥后重量约为443g。
(2)重氮化:在装有搅拌器、温度计、滴液漏斗的反应瓶中将51ml苯胺与40ml水的溶液与129ml浓盐酸混合生成苯胺盐酸盐,用冰盐浴冷却至0℃;另将36g亚硝酸钠溶于87ml水中用冰盐浴冷却至0℃以下,将此溶液慢慢滴加到苯胺盐酸盐中,温度不超过5℃。当快滴完时用淀粉碘化钾试制检验终点,试纸变为蓝色即停止滴加亚硝酸钠溶液,此时生成的氯化重氮苯为亮黄色的透明溶液,再继续搅拌0.5小时,于0-5℃保存待用。
(3)偶合:在装有搅拌器、温度计、滴液漏斗的反应瓶中将磺化生成的β-萘酚-6-磺酸钠120g溶于事先配好的180g碳酸钠的6000ml水溶液中,PH=10.5，降至0℃,慢慢滴加氯化重氮苯,温度维持在0-3℃,反应中PH保持在8-9。滴完后用盐酸调PH=4.5,继续搅拌1小时,过滤得到紫红色的粗品染料150g,用2250ml乙醇重结晶后纯品在真空干燥箱中60°C干燥得到成品藏花橙G约120g[1]。
应用
专利CN201910204110.2提供了一种藏花橙G在制备淀粉样蛋白的探针或抑制剂中的应用，涉及生物检测或生物医药技术领域。本发明研究证实：藏花橙G及其衍生物酸性铬蓝等对淀粉样蛋白比如“溶菌酶纤维”或“牛胰岛素纤维”等具有识别或抑制的功能；并且识别作用较强，具有较低的检测限和较高的检测灵敏度。通过SERS技术及分子模拟(MD)相结合，本发明研究确定：藏花橙G与淀粉样蛋白比如牛胰岛素的结合方式主要是藏花橙G的磺酸基与淀粉样蛋白的氨基酸残基Gly、Tyr和Ile相结合；其作用力主要为疏水作用和静电作用的结合。利用藏花橙G及其衍生物的这一特性，可以将藏花橙G及其衍生物应用于淀粉样蛋白的探针或抑制剂的制备[2]。
参考文献
[1] 天津市化学试剂研究所. 酸性橙-12的制备方法:CN201110225287.4[P]. 2011-12-21.
[2] 吉林大学. 一种藏花橙G及其衍生物在制备淀粉样蛋白的探针或抑制剂中的应用:CN201910204110.2[P]. 2021-11-02.