简介
三丙酸甘油酯常温下为稳定的无色油状脂类液体，可与缓冲液、有机溶剂良好混溶；其主要用作CRL酶活性检测的专用底物，在滴定监测体系中发生水解反应生成对应产物，以此精准测定酶的催化活性。
三丙酸甘油酯的性状
合成
称取丁酸（80 mmol，7.04 g）、甘油（10 mmol，0.92 g）和1-磺丁基-3-甲基咪唑硫酸氢盐（相对于总底物质量为5%w/w，0.40 g）放入圆底烧瓶中。反应混合物在100°C~130°C的恒温控制油浴中进行磁力搅拌2小时。完成后，在剧烈混合下使用20mL正己烷和20mL去离子水对粗产物进行液-液萃取得到标题化合物三丙酸甘油酯[1]。
用途
三丙酸甘油酯在该催化加氢反应体系中作为反应助剂/功能性辅料，配合催化剂与溶剂参与反应体系构建，辅助完成苯胺相关催化合成并用于后续检测纯化。例如：向装有搅拌棒的8mL玻璃小瓶中装入取代苯胺（0.5mmol）、作为内标的正十六烷（50mg）、[Ru（acac）3]（2-4mol%）、三磷酸盐（3-6mol%）、作为溶剂的THF（2mL）、三丙酸甘油酯和新制备的0.2M助催化剂HNTf2（5-10mol%）的THF溶液。用装有注射器的隔膜盖住反应瓶。将小瓶放在合金板上。将小瓶放入300毫升高压釜中。密封后，用30巴氢气吹扫高压釜三次。将高压釜加压至60巴。将高压釜放入铝块中。将高压釜预热至130°C。18小时后，在冰浴中冷却高压釜。小心地释放剩余的气体。用乙酸乙酯稀释反应混合物。通过GC和GC-MS分析反应混合物。通过硅胶柱色谱法（正庚烷/乙酸乙酯混合物）纯化反应混合物[2]。
此外，三丙酸甘油酯在此酶活测定实验中作为反应底物，用于测定CRL酶活性并生成相应水解产物。例如：使用自动滴定仪pH-Stat进行CRL的标准活性测定。保持反应混合物含有25 mM pH 7.0的tris-HCl缓冲液和100 mM NaCl（18.4 mL）、乙腈（0.6 mL）和三丙酸甘油酯（1 mL）。机械搅拌混合物，使三丙酸甘油酯和CRL均匀分散。通过加入水中溶解的CRL提取物（储备溶液：10mg/mL；样品：20-100μL）开始反应。在室温下监测反应600秒。使用100 mM NaOH标准溶液作为滴定剂，通过滴定仪将pH值保持在7.0，以获得二丙瑞宁和丙酸[3]。
参考文献
[1] Synthesis of tributyrin and tripropionin and their alleviative effects on colitis and gut microbiota in mice By: Huang, Shouhe; et al. Chemical Engineering Journal (Amsterdam, Netherlands) (2025), 516, 164178.
[2] Esters, Including Triglycerides, and Hydrogen as Feedstocks for the Ruthenium-Catalyzed Direct N-Alkylation of Amines By: Adam, Rosa; et al. Angewandte Chemie, International Edition (2016), 55(37), 11049-11053.
[3] Stepping into the biocatalysis lab for undergraduate students: from enzyme immobilization to product isolation By: Robescu, Marina S.; et al. Journal of Chemical Education (2024), 101(7), 2790-2795.