核酸外切酶III（Exo Ⅲ）是分子量为28 askD的单体蛋白质，沉降系数(S20，w)为2.92并且是球形的(f/fo = 1.15)。Mol等报道了Exo Ⅲ的1.7 A高分辨率晶体结构，该结构具有2倍对称、4层αβ折叠结构，与DNase Ⅰ和RNase H的结构有相似之处。Exo Ⅲ可以催化dsDNA中几种磷酯键的水解，包括3'-5'外切酶活性、3'磷酸酶活性和AP内切酶活性。另外，还具有RNase H活性。1
作用
核酸外切酶III作用于双链 DNA，沿 3´ 羟基末端方向逐步催化去除单核苷酸。每次酶与底物结合催化时，只有少量核苷酸被去除，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。报告显示，核酸外切酶 III 也有 RNase H 活性、3´ 磷酸酶活性和脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶活性。[2-3]
尽管该酶也可作用于双链 DNA 的切刻以产生单链缺口，但其最适底物是平末端或 3´ 凹陷末端。 3’突出末端切割活性被抑制 抗切割程度随突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端则几乎完全抑制切割。
用途
定点突变
制备用于双脱氧测序的单链 DNA
在双链 DNA 中创造巢式缺失
参考文献
[1]宋欢, 罗云波, 许文涛. 外切酶Ⅲ介导的功能核酸生物传感器研究进展. 生物技术通报, 2018, 34(9): 55-69
[2]Rogers, G.S. and Weiss, B. (1980). L. Grossman and K. Moldave(Ed.), Methods Enzymol.. 65, 201-211. New York: Academic Press.
[3]Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd. Ed.). 5.84-5.85.