基本信息
产品名称 | Exonuclease III | 货号 | P-PR1363 |
规格 | 5000U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Exonuclease III
作用机制：一种3'-5'核酸外切酶，可从双链DNA的3'末端开始降解DNA链，产生单链DNA片段，同时可去除DNA链3'末端的突出碱基，但对单链DNA无作用，也无法降解双链DNA的5'突出末端。
适用样本：双链DNA模板，可用于制备单链DNA、DNA序列分析、DNA片段末端修饰等实验。
产品概述
这是一种从大肠杆菌中分离得到的核酸外切酶，具有3'→5'外切酶活性，可从双链DNA的3'末端开始降解DNA，产生5'-单核苷酸，同时还具有RNase H活性、核酸酶活性和AP位点内切酶活性。它能特异性作用于双链DNA，对单链DNA几乎无活性，可用于构建嵌套缺失突变体、DNA序列分析、去除DNA双链中的3'突出末端等实验，是分子克隆和DNA结构研究中的常用工具。
产品特点
3'→5'外切酶活性：从双链DNA的3'末端逐步降解产生5'-单核苷酸
多功能酶活性：同时具备RNase H、核酸酶和AP内切酶活性
单链DNA抗性：对单链DNA几乎无活性，保证反应特异性
突变体构建：可用于构建嵌套缺失突变体，研究基因功能区域
操作步骤
样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀
初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀
柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液
洗涤纯化：
向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发
RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物
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注意事项
溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。
反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。
推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。
关键字： RNaseOUT-RNase Inhib;
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