氯碘羟喹的检测与有关研究

研究背景

氯碘羟喹从1934年开始作为一种口服抗菌药广泛应用于胃肠道感染性疾病，后来因为发现其能诱发亚急性脊髓视神经病而被限制使用。2005年开始，陆续有研究报道，氯碘羟喹具有诱导癌细胞凋亡的作用，随后针对氯碘羟喹抗癌作用机制的一系列研究逐渐开展，并证实其能作为铜，锌等金属离子载体，通过多种细胞通路诱导癌细胞的凋亡，因此氯碘羟喹抗癌作用的研究得到重视^[1]。

检测方法

文献公开了一种基于AuNCs/CDs@SiO₂的比率荧光检测氯碘羟喹的方法。首先，将金纳米簇与二氧化硅包覆碳点复合制备成AuNCs/CDs@SiO₂。将CuCl₂溶液、不同浓度的氯碘羟喹溶液和H₂O加入离心管中反应；将AuNCs/CDs@SiO₂加入反应混合物中反应；反应后采用荧光光度计测定反应所得混合溶液的荧光发射光谱，在Xe灯下激发，记录波长为420nm和595nm处的荧光强度；并绘制以CQ浓度为横坐标、以420nm和595nm处的荧光强度比值为纵坐标的标准工作曲线；将待测的氯碘羟喹样品重复上述步骤，用荧光光度计分别测定待测样品与体系反应后的荧光强度比值，经计算得到待测氯碘羟喹CQ的浓度。利用该发明检测氯碘羟喹，其灵敏度和准确度均较高^[2]。

细胞分子作用机制研究

近年来有研究表明，氯碘羟喹对神经退行性疾病和肿瘤具有较好的治疗作用，使其再次成为研究热点。但在许多情况下，这些治疗作用和副作用背后的分子机制尚不清楚。为了能安全用于临床并尽量减轻副作用，对其作用的分子机制进行研究十分必要，研究热对氯碘羟喹的细胞分子机制进行了初步的研究。通过细胞毒性实验发现氯碘羟喹对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y，宫颈癌细胞HeLa，肝癌细胞SMMU7721以及正常肝细胞QSG7701的生长均有不同程度的抑制作用，但在小浓度长时间的作用下发现对正常细胞的毒性比较小。通过流式细胞术发现氯碘羟喹能引起SH-SY5Y和SMMU7721细胞自吞噬，随后吖啶橙染色检测细胞内酸性内容物增多，加入自吞噬特异性抑制剂3-MA后，自吞噬被抑制，同时自吞噬标志蛋白LC3的蛋白免疫印迹进一步证实了这一点。细胞凋亡的研究发现氯碘羟喹能引起SMMU772细胞凋亡，但对SH-SY5Y细胞无作用，与Hochest33258染色荧光显微镜观察所得结果一致。细胞周期检测发现SH-SY5Y和SMMU7721在氯碘羟喹作用下，S期受到明显阻滞，且硫胺素转运子竞争性抑制剂氨丙啉也同样会引起者两者S期阻滞，表明氯碘羟喹除了对细胞的两种程序性细胞死亡途径有影响，还可能与硫胺素的吸收，转运和代谢相关。

为了证实上述观点，研究人员进一步通过高效液相色谱和荧光检测相结合，检测氯碘羟喹对细胞内硫胺素和焦磷酸硫胺素含量的影响，发现氯碘羟喹明显减少细胞内硫胺素的含量，而焦磷酸硫胺素含量出现了增加。通过检测以焦磷酸硫胺素为辅酶的转酮醇酶酶活，表明氯碘羟喹显著减弱该酶活性，而对转酮醇酶的mRNA和蛋白表达水平的研究发现，虽然氯碘羟喹对转酮醇酶的mRNA水平无明显影响，但下调了其蛋白的表达。综上所述，氯碘羟喹参与了硫胺素吸收，转运和代谢表现硫胺素拮抗效应，同时也可以引起细胞自吞噬，周期阻滞和/或细胞凋亡。总之，氯碘羟喹通过多种信号通路影响细胞的生长增殖，且对不同类型的细胞表现不同的生物活性^[3]。

参考文献

[1]李凯舒,何明亮,皮荣标,等.经典抗菌药氯碘羟喹抗癌机制的研究进展[J].中国新药杂志, 2015, 24(9):5.

[2]王孟珂,王顺,陈俊阳,等.一种基于AuNCs/CDs@SiO₂的比率荧光检测氯碘羟喹的方法:202410901898[P].

[3]氯碘羟喹的细胞分子作用机制研究[J].  2013.