梭菌属测定用培养基的用途实例

梭菌属均为严格厌氧芽孢菌，检测需配套还原型厌氧培养基，整套体系分为通用增菌、选择性分离、生化鉴定三类，强化梭菌培养基（RCM）是药典规定的梭菌通用基础测定培养基，市面成品 “梭菌属测定用培养基” 为改良型选择性琼脂，配套完成梭菌全流程检测。

应用

试验以从河南省鄢陵县农户肉猪养殖场中采集的新鲜猪粪为样本,经过梭菌属测定用培养基(RCM)富集和TSN选择性琼脂培养基进行分离筛选和生理生化鉴定,得到2株菌株,分别命名为B1和B3。冯腾柱等人通过提取菌株DNA,并对16S rDNA序列进行扩增和测序,根据其同源性亲疏建立系统发育树,二者均被鉴定均为丁酸梭菌(Clostridium butyricum)。对2株菌的发酵特性进行测定,分析发酵液中菌浓度、pH值、还原糖、乙酸和丁酸含量随时间的变化。结果表明,B1和B3菌株在葡萄糖利用和乙酸的代谢水平上存在差异[1]。

董秀梅等人为探究黑龙江省某动物园狼急性死亡病例的病原菌及其生物学特性,本研究采集病死狼心血、肝、脾及颌下淋巴结样品,经细菌分离纯化,结果显示,上述样品接种鲜血琼脂培养基厌氧培养24h后可见灰白色、双层溶血环的菌落,在梭菌属测定用培养基上形成黑色圆形菌落;革兰染色镜检可见单个或呈短链状排列的革兰阳性粗大杆菌。通过生化试验和16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析对分离菌进行鉴定,并进一步经PCR扩增确定分离菌的毒素型。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,且还原性硝酸盐试验、明胶液化和牛奶爆裂发酵均呈阳性,且无运动性;16SrRNA基因、毒素基因的PCR扩增和遗传进化分析结果表明分离菌为A型产气荚膜梭菌,命名为HLJ15-2。经多序列位点分型分析(MLST)确定分离菌的ST型,结果显示分离菌为ST221型,属于鸡源菌。采用K-B纸片扩散法对分离菌进行药敏试验,结果显示该菌对氟苯尼考、头孢呋辛钠、头孢噻肟等磺胺类和喹诺酮类抗菌药敏感。小鼠分别经腹腔接种10倍倍比稀释(5.21×10⁵cfu/mL-1.52x10⁹cfu/mL)的HLJ15-2菌液,计算该菌对小鼠的半数致死量(LD50),采集病死小鼠肝、脾、肠进行组织病理学观察分析分离菌对小鼠的致病性,结果显示分离菌LD₅₀为2.26×10⁷cfu/mL,剖检小鼠可见肝脏、脾脏均有出血,肠道膨隆,肠黏膜充血,组织病理切片观察可见肝内各级血管淤血,肝细胞条锁状排列消失,胞浆内出现大小不等的空泡;脾脏红髓比例增加,白髓部分细胞坏死;肠绒毛断裂,黏膜固有层上皮细胞增生、黏膜下层红细胞增多、充血、炎性细胞浸润。本研究首次报道了致病性A型产气荚膜梭菌可感染狼,并导致其急性死亡,为野生动物梭菌性传染病的诊断与防控提供参考[2]。

参考文献

[1] 冯腾柱,李市场,龚明贵,等. 猪粪便中丁酸梭菌的分离与鉴定[J]. 饲料研究,2021,44(21):79-82. DOI:10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.017.

[2] 董秀梅,李秀云,刘念,等. 狼源产气荚膜梭菌的分离鉴定及分子分型[J]. 中国预防兽医学报,2022,44(8):831-836. DOI:10.3969/j.issn.1008-0589.202201001.