AVPR1B抗体在相关研究中可应用的探索讨论

2026/10/19 8:01:11 作者:观微

攻击行为的生物学研究近年已转向遗传易感性分析,精氨酸加压素1b受体(AVPR1B,即V1b受体)是其中被反复提及的一个位点。该分子属G蛋白偶联受体家族,与V1a受体、催产素受体同源,在下丘脑与边缘系统表达,参与下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)调节。而AVPR1B抗体所识别的,正是该受体的蛋白形式,在基因交互、基因敲除、病例对照等方面广泛应用。

在父母婚姻冲突与大学生攻击行为的关联研究中,以广州市某工科院校188名在校大学生为对象,用量表分别评估父母婚姻冲突、情绪不安全感与攻击行为,并以唾液DNA试剂盒采集每名被试不少于3 mL唾液,经Sequenom MassARRAY平台对AVPR1B基因rs28373064位点做基因分型。该位点分布为AA 151例(80%)、AG 35例(19%)、GG 2例(1%),小等位基因频率0.12,未偏离Hardy-Weinberg平衡。有调节的中介模型显示,父母婚姻冲突、情绪不安全感与攻击行为之间的间接路径在AA纯合个体中效应更强(β=0.44,P<0.001),AG/GG携带者中则不显著(β=0.02)[1]。不过本研究只有量表得分与基因型两类数据,如果要检测受体蛋白在脑区的表达量与定位,可使用AVPR1B抗体进行测量。

对男性青少年暴力攻击行为进行研究。采用SNaPshot多重碱基延伸技术,对138名有暴力攻击行为的男性少教人员、98名非暴力男性少教人员与153名正常男性做基因分型,同时检测AVPR1A(rs1042615)、AVPR1B(rs28632197)与催产素受体基因的5个位点。结果只有AVPR1B的rs28632197位点出现组间差异:暴力组A等位基因频率明显高于另外两组,OR值分别为2.24与2.63,95%置信区间为1.45~3.47与1.78~3.88,含A等位基因的AA/AG基因型频率同样更高。数据得出该位点是AVPR1B外显子上的非同义突变,可使受体C端精氨酸被组氨酸替代[2]。不过受体蛋白的表达水平与亚细胞分布始一样未被直接测定,若想得到关于受体蛋白的数据和表达分布,AVPR1B抗体是实验检测不错的选择。

功能层面的对照方面,研究用CRISPR/Cas9构建AvpR1b敲除SD大鼠,以10周龄雌鼠为对象,先做基因型鉴定,野生型PCR产物883 bp、敲除型786 bp,证实第一外显子97 bp序列被成功敲除。随后用原位杂交检测室旁核与视上核的受体表达,敲除鼠两处均无信号,而血浆皮质酮与行为学指标与野生型均无显著差异[3]。本研究依然未用到识别AVPR1B蛋白的AVPR1B抗体。敲除后受体是否真正缺失,在蛋白层面仍未得出结论,这恰是AVPR1B抗体的用武之地。

AvpR1b基因敲除对大鼠室旁核和视上核精氨酸加压素1b受体表达的影响.png

实际操作上,以上文献可作为使用AVPR1B抗体的参照系。敲除鼠的原位杂交流程相当完整,心脏灌流后以4%多聚甲醛固定24 h、蔗糖梯度脱水、冰冻冠状切片,蛋白酶K缓冲液室温10 min,预杂交液室温1 h,探针85℃金属浴5 min后冰浴3 min,65℃水浴杂交12~16 h,含羊血清缓冲液室温封闭1 h,抗地高辛抗体4℃孵育过夜,显色2 h后在20倍镜下采集。若换成蛋白检测,还需考虑,AVPR1B是七次跨膜的膜受体,高温变性易聚集,样品处理应控温并减少反复冻融。表位宜避开可变剪接的胞内尾段。

选择AVPR1B抗体时,有以下注意事项。第一是表位归属,AVPR1B与V1a受体、催产素受体结构高度相似,文献提到AVP与催产素的受体同属G蛋白偶联受体家族、相似度达85%,免疫原应落在AVPR1B的特异序列上,并以V1a受体或催产素受体的过表达裂解液作交叉反应对照。第二是物种覆盖,以上文献涉及人与大鼠,若以人源序列为免疫原,须先确认对大鼠靶蛋白的反应性。第三是对照设置,敲除鼠与其同窝野生型恰好构成一对现成样本,能否在两者裂解液中给出可区分的条带,是AVPR1B抗体最直接的验证。

参考文献

[1] 刘莎, 杜铭诗. 父母婚姻冲突与大学生攻击行为的关系:情绪不安全感的中介作用与AVPR1B基因多态性的调节作用[J]. 中国健康心理学杂志, 2021, 29(6): 945-950.

[2] 刘丽, 乔屹, 禹顺英, 等. 精氨酸加压素受体和催产素受体基因多态性与男性青少年暴力攻击行为的关联研究[J]. 临床精神医学杂志, 2016, 26(2): 73-78.

[3] 赵崟机, 樊圃. 精氨酸加压素1b受体敲除对雌性大鼠焦虑和社交行为的影响[J]. 中国比较医学杂志, 2022, 32(6): 69-75.

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