介绍
人参皂苷RA3（Ginsenoside Ra3）是一种主要存在于人参等五加科人参属植物中的天然三萜皂苷，属于原人参二醇型达玛烷皂苷；其分子式为 C₅₉H₁₀₀O₂₇，结构以20(S)-原人参二醇为苷元，并通过糖基连接形成较复杂的糖链，因而极性较强、口服后通常需经肠道菌群代谢转化。现有研究提示它可能具有抗氧化、抗炎、免疫调节及一定的抗肿瘤等活性。
图一 人参皂苷RA3
鉴定人参、黄芪中的人参皂苷RA3
人参、黄芪中的人参皂苷RA3分析的前处理
称取黄芪饮片120g加12倍量水煎煮2次，每次1h，得滤液。将两次所得滤液合并，滤液减压浓缩，置真空干燥箱(50~60℃)中减压干燥，得干膏，称量。称取72g人参单独打粉，过六号筛，与黄芪干膏混匀。取干膏研磨至均匀，精密称定干膏，置具塞锥形瓶中。加人甲醇-水(1：1)10mL，密塞，称定其质量，超声处理60 min，用甲醇-水（1：1）补足至原质量后，摇匀，8000r·min-1离心10min,取上清液，用0.22m滤膜过滤，即得。取人参皂苷Rb1，人参皂苷Rg1和黄芪甲苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成混合对照品溶液。人参、黄芪以60 kg 成人生药用量的30倍[成人用量×鼠质量(kg)/60(kg)×30]灌胃给药。取干膏适量，研磨均匀并用体积分数1%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）制成混悬液，空白对照组用体积分数1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。大鼠连续灌胃7次，给药隔12h，末次给药前禁食不禁水 12 h。两组分别于末次给药后2h用体积分数2%的戊巴比妥钠轻度麻醉，腹主动脉采血。室温静置1 h,3000r⋅min−1，离心15min(4℃），取上清液，即得，血清放置于-80℃冰箱冷冻保存备用。分别取空白血清及含药血清样品400μL，加入5倍量甲醇溶液，涡旋1 min,离心10 min(12 000 r·min-1)，取上清液，用氮气吹干，残渣加入 200μL 甲醇复溶，离心10 min(12000 r ⋅min−1)，上清液用于液质联用仪分析。
人参、黄芪体外供试品化学成分的认定
共鉴定人参、黄芪的化学成分13个，总离子流图见图二， UPLC-MS/MS 数据及结果推测。其中来源于人参的化学成分9个，分别是人参皂苷Rg1、人参皂苷Ra1、人参皂苷RA3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg5三七皂苷Fe;来源于黄芪的化学成分4个，分别是黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、山柰酚苷。
图二 人参黄芪药对总离子流程图
对获得的3个提取离子流图进行比较，在给药血清和药材供试品溶液中对应位置共同存在而在空白血浆中未出现的色谱峰，推断可能为吸收入血的成分。经含药血清样品、空白血清样品、人参与黄芪供试品的离子色谱图比对分析，结果见图三，发现人参皂苷Ra1在给药血清和药材供试品溶液中对应位置共同存在而在空白血清中未出现的色谱峰，推断可能为吸收入血的成分。其余血中移行成分归属方法均与人参皂苷Ra1相同，共鉴定正常大鼠含药血清中含有11种原型成分，UPLC-MS/MS数据及结果推测。其中来源于人参的化学成分8个，分别是人参皂苷Ra1、人参皂苷RA3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg5、三七皂苷Fe;来源于黄芪的化学成分3个，分别是毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、山柰酚苷[1]。
图三 正常健康大鼠含药血清 UPLC-MS/MS 数据及结果推测
参考文献
[1]李泽文,李丹,李嘉星,等. 鲜人参中丙二酰基人参皂苷-Ra1、-Ra2的分离及结构鉴定[J]. 中国中药杂志,2024,49(12):3252-3257. DOI:10.19540/j.cnki.cjcmm.20240320.201