酶联免疫吸附测定
双抗夹心法
血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本
人白细胞介素15酶联免疫试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中IL-15浓度。
将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体,将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
可检测样本中的IL-15,且与其它类似物无明显交叉反应。
IL-15 首次在猴肾上皮细胞培养介质中发现,人 IL-15 在皮肤 T 淋巴细胞 HuT 102 细胞中首次被发现,它能刺激 T 细胞的增殖并且产生产生 IL-T。目前人、猴和小鼠的 IL-15 的 cDNAs 已得到分离和鉴定,IL-15 的由 162 个氨基酸残基前体构成,包括 48 个氨基酸组成的前导序列和 114 个氨基酸组成的成熟 IL-15 亚单位。人体内还发现了一个具有同样成熟序列和较短信号序列的选择性剪接体,以及一个膜结合的 IL-15,猴和小鼠 IL-15 与人 IL-15 分别具有 97% 和 73%的氨基酸序列同源性,人和猴的 IL-15 都对小鼠细胞有活性。 IL-15 的受体在 T 细胞,B 细胞,自然杀伤细胞和一些非淋巴细胞中都能检测到,IL-15 的受体由三个分子构成:一段 IL-15 特异的α链,和一段与 IL-2 受体系统相同的β链和γ链,α链由 237 个氨基酸构成,与 IL-15 具有高亲和力,它能单独发挥多种功能,而β链和γ链通过组成βγ二聚体发挥信号传导作用。 IL-15 的结构和生物特性与 IL-2 相似,但体内分布远较 IL-2 广泛,它在免疫调节和免疫应答尤其是在抗肿瘤免疫应答中有重要作用。它能刺激自然杀伤细胞的生长,激活外周血 T 淋巴细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞和 B 细胞,此外,IL-15 还能作为人血 T 淋巴细胞的化学引诱物,改变自然杀伤细胞中的淋巴因子激活的杀伤细胞的活性,和细胞毒性效应细胞的增殖。IL-15 还能影响不予免疫反应相关的细胞,如骨骼肌细胞能表达 IL-15 和 IL-15 的受体的 mRNA,并且对 IL-15 产生反应。