AZ20

AZ20是强效的选择性ATR抑制剂，IC50为5 nM.。AZ20显示了对所有PI3K亚型与ATM和DNA-PK在一起的良好选择性。 在体外，AZ20呈浓度依赖性降低pChk1 Ser345，pChk1 Ser317和pChk1 Ser296水平。延长AZ20的处理时间增加了γH2AX核染色，这是复制压力的表现。这和S期阻滞和增加的组蛋白H3的磷酸化相关。AZ20诱导体外的生长抑制和细胞死亡和它的的活性是和其它细胞毒性药物截然不同的。AZ2的细胞毒作用在和ATM 抑制剂KU-60019联用时提高。LoVo肿瘤的雌性裸鼠口服AZ20，25毫克/公斤每天两次，或50毫克/公斤每天一次，服用13天显著抑制肿瘤生长。 这是与异种移植组织中γH2AX的广泛的核染色持续升高有关，但在治疗剂量导致小鼠骨髓中瞬时升高，这表明AZ20的良好的治疗特性。 AZ20是评估药物-药物潜在相互作用（DDI），特别是抑制细胞色素P450酶。 AZ20（10 μM）抑制细胞色素3A4介导的咪达唑仑的代谢，抑制率达50％。AZ20在大鼠PK研究中有良好的生物利用度。AZ20为首次报道的在体内显示出抑制肿瘤生长的ATR蛋白激酶抑制剂。

ATR 5 nM (IC 50 )

mTOR 38 nM (IC 50 )

PI3Kα 13000 nM (IC 50 )

以化合物（CAS:1233339-68-8）和4-吲哚硼酸为原料，合成(R)-4-(2-(1H-吲哚-4-基)-6-(1-(甲基磺酰基)环丙基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉的一般步骤如下： 1. 在DME:水（4:1，170mL）中悬浮双（三苯基膦）氯化钯（1.692g，2.41mmol）、(R)-4-(2-氯-6-(1-(甲基磺酰基)环丙基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉（8.00g，24.11mmol）、1H-吲哚-4-基硼酸（4.27g，26.52mmol）和2M碳酸钠水溶液（36.2mL，72.33mmol），加热至90℃反应过夜。 2. 反应完成后，除去DME，用EtOAc（100mL）稀释反应混合物。 3. 用水（2×100mL）洗涤混合物，分离有机相，通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，得到粗产物。 4. 通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，洗脱梯度为0至10% EtOAc的DCM溶液。合并含有目标产物的级分，蒸发溶剂。 5. 再次通过硅胶柱色谱法纯化残余物，洗脱梯度为0至25% EtOAc的DCM溶液。合并含有目标产物的级分，蒸发溶剂。 6. 将残余物溶解后，通过反相C18硅胶柱（415g HP C18柱）进行纯化，使用水（含1% NH3）和MeCN的混合物作为洗脱液，极性递减。合并含有目标产物的级分，蒸发溶剂。 7. 将残余物溶于无水MeOH中，用MgSO4干燥，过滤后蒸发溶剂，得到胶状物。 8. 将胶状物溶于DCM（500mL）中，过滤后减压除去溶剂。 9. 将残余物溶于MeOH（50mL）中，室温下搅拌过夜，过滤收集生成的沉淀，得到目标产物(R)-4-(2-(1H-吲哚-4-基)-6-(1-(甲基磺酰基)环丙基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉（5.10g，产率51%）。 产物表征：1H NMR（400MHz, DMSO-d6）δ 1.29（3H, d）, 1.57-1.64（2H, m）, 1.68-1.78（2H, m）, 3.24-3.31（1H, td）, 3.29（3H, s）, 3.51（1H, td）, 3.67（1H, dd）, 3.80（1H, d）, 3.93-4.06（1H, dd）, 4.21（1H, d）, 4.61（1H, bs）, 6.85（1H, s）, 7.21（1H, t）, 7.32（1H, t）, 7.46（1H, t）, 7.56（1H, d）, 8.06（1H, dd）, 11.25（1H, s）; m/z (ESI+) MH+, 413.12。手性HPLC分析（HPI 100系统4,5μm Chiralpak AS-H（250mm×4.6mm）柱，洗脱条件：异己烷/EtOH/TEA 60/40/0.1）显示Rf值为8.815，纯度>99%。

参考文献：

[1] Patent: WO2010/73034, 2010, A1. Location in patent: Page/Page column 68-69

[2] Journal of Medicinal Chemistry, 2013, vol. 56, # 5, p. 2125 - 2138