小鼠乳腺癌细胞

小鼠乳腺癌细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当注射到BALB/c小鼠中时，小鼠乳腺癌细胞自发产生高转移肿瘤，可转移到肺，肝，淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶。诱导转移时不需要摘除始发灶。

4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高转移肿瘤，可转移到肺、肝、淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶，诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近，这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比，由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团（少到仅仅1个）也可以在许多远端器官中检测到，没必要数淋巴结或称重器官。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心3分钟，弃去上清液，补加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入

培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中），加入约8 mL培养基，培养过夜培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

乳腺癌细胞

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

小鼠，BALB/cfC3H品系乳腺88%RPMI-1640+10% FBS+1%Glutamax+1%Sodium Pyruvate贴壁生长（Adherent）Female上皮样，贴壁生长肿瘤细胞