(S)-2-乙酰胺基-6-((叔丁氧羰基)氨基)己酸

2418-95-3

75-36-5

23500-04-1

实施例A73制备Ar2-乙酰基-L-赖氨酰-L-缬氨酰基-A-氨基甲酰基-Ar-[4-({[(2-{[(3i,51S',7i,8i)-8-羟基-7-{(1￡,3￡)-5-[(21S,35',5i',6i')-5-{[(2Z,41S)-4-羟基-2-烯酰基]氨基}-3,6-二甲基四氢-2H-吡喃-2-基]-3-甲基戊-1,3-二烯-1-基}-1,6-二氧杂螺[2.5]辛-5-基]乙酰基}肼基)羰基]氧基}甲基)苯基]-L-鸟氨酰胺，乙酸盐（B222）。 B227步骤1.N2-乙酰基-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸（B223）的合成。向N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸（22.5g，91.5mmol，1当量）和K2CO3（63.1g，0.457mol，5当量）在四氢呋喃/水（200mL/200mL）中的混合物在0℃下加入乙酰氯（8.62g，0.109mol，1.2当量），并将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物真空浓缩以除去四氢呋喃，并用2M HCl将水层调节至pH=1并用EtOAc（100mL）萃取三次。萃取物用盐水（100mL）洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到B223（23.1g，87.7%），为黄色油状物。步骤2.N2-乙酰基-L-赖氨酸盐酸盐（B224）的合成。在0℃下，向B223（23.1g，0.080mmol，1当量）的乙酸乙酯（400mL）溶液中，在氮气下，在乙酸乙酯（250mL）中加入HCl（g）。将混合物在室温下搅拌4小时并过滤。将固体用乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到B224（18.5g，>100%），为白色固体，其不经进一步纯化而使用。步骤3.N2-乙酰基-N6-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸（B225）的合成。在0℃下向B224（8g，35.6mmol，1当量）和NaHCO3（5.99g，71.3mmol，2当量）在丙酮/水（80mL/80mL）中的混合物中加入Fmoc-Cl（9.41g，36.3mmol，1.02当量）在丙酮（80mL）中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。用2N HCl将混合物调节至pH=3-4，并用乙酸乙酯（100mL）萃取三次。萃取物用盐水（100mL）洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物（7g），为黄色油状物。向粗产物中加入二氯甲烷和叔丁基甲基醚（100mL），将悬浮液搅拌30分钟，然后过滤。将滤饼真空干燥，得到B225（3.25g，22.2%），为白色固体。步骤4.N2-乙酰基-N6-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酰-L-缬氨酰-N5-氨基甲酰基-N-[4-(羟甲基)苯基]-L-鸟氨酰胺的合成（B226）。在0℃下，向N2-二甲基甲酰胺（20mL）中的B225（1.04g，2.54mmol，1当量）的混合物中加入N-甲基吗啉（769mg，7.61mmol，3当量），1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺-HCl（632mg，3.30mmol，1.3当量），1-羟基苯并三唑水合物（445mg，3.30mmol，1.3当量）和L-缬氨酰基-N5-氨基甲酰基-N-[4-(羟甲基)苯基]-L-鸟氨酰胺（来自WO04010957,1.01g，2.66mmol，1.05当量），并将该混合物在室温下搅拌2小时。将混合物倒入叔丁基甲基醚（300mL）中并过滤。将固体用二氯甲烷（50mL）和水（50mL）洗涤，真空干燥，得到B226（1.87g，95.6%），为白色固体。步骤5.N2-乙酰基-N6-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酰-L-缬氨酰-N5-氨基甲酰基-N-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-L-鸟氨酰胺（B227）。在0℃下，向N2-二甲基甲酰胺（30mL）中的B226（1.87g，2.43mmol，1当量）和双-(4-硝基苯基)碳酸酯（2.21g，7.28mmol，3当量）在NN-二甲基甲酰胺（30mL）中的混合物中添加在氮气下，NN-二异丙基乙胺（313mg，2.43mmol，1当量），并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入叔丁基甲基醚（50mL）中并过滤。通过制备型HPLC纯化固体（1.95g），得到B227（580mg，25.7%），为白色固体。1H NMR（400Hz，DMSO-dg）：10.1（s，1H），8.29（d，2H），8.00（d，1H），7.86（d，1H），7.65（d，2H），7.64（d，1H），7.61（m，4H），7.40（m，2H），7.38（m，4H），7.30（m，3H），6.01（br，1H），5.21（s，2H），4.35（br，1H），4.27-4.15（m，5H），2.96（m，4H），1.98（m，1H），1.82（s，3H），1.65（br，3H），1.43-1.24（m，7H），0.83（m，6H）。步骤6.N2-乙酰基-N6-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酰-L-缬氨酰-N5-氨基甲酰基-N-[4-({[(2-{[(3R,5S,7R,8R)-8-羟基-7-{(1￡',3￡')-5-[(2S,3S,5R,6R)-5-{[(2Z,4S)-4-羟基-2-烯酰基]氨基}-3,6-二甲基四氢-2H-吡喃-2-基]-3-甲基戊-1,3-二烯-1-基}-1.6-二氧杂螺[2.5]辛-5-基]乙酰基}肼基)羰基]氧基}甲基)苯基]-L-鸟氨酰胺（B228）。在室温下，向B209（8.1mg，0.016mmol，1当量）的NN-二甲基甲酰胺（0.4mL）溶液中加入2,6-二甲基吡啶（7.5μL，0.064mmol，4当量），N,N-二异丙基乙胺（11.3L，0.064mmol，4当量）和4-NN-二甲基氨基吡啶（2mg，0.016mmol，1当量），然后加入B227（17.8mg，0.019mmol，1.2当量），搅拌反应物5小时通过反相色谱法（方法A）纯化反应，得到B228，为白色固体。产量：5.5mg，0.004mmol，26%。LCMS（方案D）：m/z 1306.1 [M+H]+，保留时间=0.81分钟

参考文献：

[1] Patent: WO2014/68443, 2014, A1. Location in patent: Page/Page column 202; 203; 204

[2] Journal of the American Chemical Society, 2018, vol. 140, # 5, p. 1572 - 1575