人永生化表皮细胞

人永生化表皮细胞（Hacat）源自一位 62 岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。
 

完全培养基：DMEM + 10%血清 + 1%双抗
培养条件：95%空气 + 5%CO2，37 ℃，湿度为 70%-80%
冻存液：90%血清 + 10% DMSO，现用现配 

细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化1-2 分 钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅 速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。
2. 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况 按 1:2~1:5的比例进行。